WikiDer > Иммуномагнитная сепарация

Immunomagnetic separation

Иммуномагнитная сепарация (IMS) - это лабораторный инструмент, с помощью которого можно эффективно изолировать клетки от жидкости организма или культивированных клеток. Его также можно использовать как метод количественной оценки патогенности пищи, крови или кала. Анализ ДНК подтвердил совместное использование этого метода и Полимеразной цепной реакции (ПЦР).[1] Еще один инструмент лабораторного разделения - это аффинная магнитная сепарация (AMS), который больше подходит для изоляции прокариотический клетки.[2]

Иммуномагнитная сепарация (IMS) - это метод, который касается выделения клеток, белков и нуклеиновых кислот в культуре клеток или жидкости организма посредством специфического захвата биомолекул посредством прикрепления небольших намагниченных частиц, шариков, содержащих антитела и лектины.[3] Эти шарики покрыты оболочкой для связывания с целевыми биомолекулами, аккуратно разделяются и проходят несколько циклов отмывки для получения целевых молекул, связанных с этими суперпарамагнитными шариками, которые могут различаться в зависимости от силы магнитного поля и целевых молекул, затем элюируются для сбора супернатанта и затем можно определить концентрацию целевых биомолекул. Метод иммуномагнитной сепарации (IMS) позволяет получить определенные концентрации определенных молекул внутри бактерий-мишеней.

Смесь клеточной популяции помещается в магнитное поле, где клетки затем прикрепляются к суперпарамагнитным шарикам, конкретным примером являются Dynabeads (4,5 мкм), которые остаются после удаления избыточного субстрата, связывающегося с антигеном-мишенью. Dynabeads состоит из железосодержащих ядер, которые покрыты тонким слоем полимерной оболочки, позволяющей абсорбировать биомолекулы. Гранулы покрыты первичными антителами, специфическими антителами, лектинами, ферментами или стрептавидином;[3] связь между намагниченными шариками, покрытыми материалами, представляет собой расщепляемую ДНК-линкер, отделение клеток от шариков, когда культивирование клеток более желательно.[4]

Многие из этих бусинок имеют одинаковые принципы разделения; однако наличие и разная сила магнитных полей требует определенных размеров бусинок в зависимости от разветвлений разделения популяции клеток. Гранулы большего размера (> 2 мкм) являются наиболее часто используемым диапазоном, который был произведен Dynal (Dynal [UK] Ltd., Wirral, Mersyside, UK; Dynal, Inc., Lake Success, NY). В то время как более мелкие шарики (<100 нм) в основном используются для системы MACS, которая была произведена Miltenyi Biotech (Miltenyi Biotech Ltd., Бисли, Суррей, Великобритания; Miltenyi Biotech Inc., Оберн, Калифорния).[3]

Иммуномагнитная сепарация (IMS) используется в различных областях науки, включая молекулярную биологию, микробиологию и иммунологию. (3) Этот метод разделения заключается не только в разделении клеток в крови, но также может быть использован для методов разделения от первичных опухолей и в исследовании метастазов путем разделения на составные части, создавая задержку единичных клеток, а затем позволяя подходящему антителу метить клетку. При исследовании метастазов этот метод разделения может оказаться необходимым для разделения, когда дана популяция клеток и вы хотите изолировать опухолевые клетки в опухолях, периферической крови и костном мозге.[5]


Техника

Покрытие антителами парамагнитный шарики будут связываться с антигенами, присутствующими на поверхности клеток, таким образом захват клетки и способствуют концентрации этих прикрепленных к шарикам клеток. Процесс концентрирования создается с помощью магнита, помещенного сбоку от пробирки, который подводит к ней шарики. Системы MACS (Система магнитного разделения клеток) [6]:[3]

Благодаря использованию суперпарамагнитных шариков меньшего размера (<100 нм), что требует более сильного магнитного поля для разделения клеток. Клетки метят первичными антителами, а затем гранулы MACS покрывают специфическими антителами. Эти меченые клеточные суспензии затем помещают в разделительную колонку в сильном магнитном поле. Меченые клетки удерживаются, намагничиваются, в то время как в магнитном поле немеченые клетки подвешиваются, не намагничиваются и собираются. После удаления из магнитного поля положительные клетки элюируются. Эти гранулы MACS затем включаются в клетки, позволяя им оставаться в колонке, поскольку они не мешают прикреплению клеток к культуральной поверхности для межклеточных взаимодействий. Затем применяется реагент для удаления гранул, чтобы ферментативно высвобождать гранулы MACS, позволяя этим клеткам повторно пометить какой-либо другой маркер, который затем сортируется.

Рекомендации

  1. ^ Энгстранд Л. и Энрот Х., Журнал клинической микробиологии, том 33, номер 8, август 1995 г., стр. 2162-2165.
  2. ^ Аффинное магнитное разделение Listeria spp. и кишечная палочка O157 (набор для улавливания бактерий)
  3. ^ а б c d Кларк, Кэтрин и Сьюзен Дэвис. «Иммуномагнитное разделение клеток». Протоколы исследования метастазов (нет данных): 017-23. Интернет.
  4. ^ Sun, C. et al. Иммуномагнитное разделение клеток-инициаторов опухоли путем скрининга двух поверхностных маркеров. Sci. Rep.7, 40632; DOI: 10.1038 / srep40632 (2017).
  5. ^ Кларк К., Титли Дж., Дэвис С. С. и О'Хара М. Дж. (1994) Метод иммуномагнитного разделения с использованием суперпарамагнитных гранул (MACS) для крупномасштабной очистки просветных и миоэпителиальных клеток молочной железы человека. Эпител. Cell Biol. 3, 38–46.
  6. ^ Милтеньи С., Мюллер В., Вейхель В. и Радбрух А. (1990) Высокоградиентное магнитное разделение ячеек с помощью MACS. Цитометрия 11, 231–238