WikiDer > LacUV5

LacUV5

В lacUV5 промотор - мутировавший промоутер от кишечная палочка лак оперон который используется в молекулярная биология водить экспрессия гена на плазмида. lacUV5 очень похож на классический лак промотор, содержащий всего 2 мутации пар оснований в -10 гексамер регион, по сравнению с лак промоутер.[1] LacUV5 является одним из наиболее часто используемых промоторов в молекулярной биологии, поскольку не требует дополнительных активаторов и обеспечивает высокий уровень экспрессии генов.[2]

В lacUV5 последовательность промотора более точно соответствует консенсусная последовательность признаны бактериальными сигма факторы чем традиционный лак промоутер делает.[3]:4b В связи с этим, lacUV5 новобранцы РНК-полимераза более эффективно, что приводит к более высокой транскрипции генов-мишеней. Кроме того, в отличие от лак промоутер, lacUV5 работает независимо от активатор белки или другие цис регуляторные элементы (кроме промоторных областей -10 и -35).[2] Пока никаких активаторов не требуется, lacUV5 экспрессия промотора может регулироваться LacI репрессор и может быть индуцирован IPTG, который является эффективным индуктором экспрессии белка при использовании в диапазоне концентраций от 100 мкМ до 1,5 мМ. Благодаря этому контролю lacUV5 промотор обычно находится в плазмидах экспрессии и используется, когда желательны контролируемые, но высокие уровни продукта.

В lacUV5 мутация была впервые обнаружена в 1970 году при исследовании лак промоторные мутанты, дающие более высокие урожаи. Некоторые из них, включая UV5, утратили катаболитную репрессию на сайте CAP.[4] Разработка векторов для клонирования известна с 1982 года, когда фаг, несущий UV5, известный как «λ h80» лакГеном UV5 cI857 "сращен с HaeIII рестрикционный фермент сделать пламиды, несущие фрагмент с UV5.[5]

Последовательность

Современное lacUV5 наблюдается в штамме BL21 (DE3), который несет как лак оперон со стандартным промотором и lacUV5 оперон, расщепленный профагом DE3 (и в результате РНК-полимераза Т7 вместо).[1] Подчеркнуты две важные мутации.

lacUV5  TCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGТАТAAТGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT[6]LacZ TCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGТАТGTТGTGTGAAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT[7]  позиция ^ -35 ^ -10 ^ + 1

Рекомендации

  1. ^ а б Studier, FW; Моффатт, Б.А. (5 мая 1986 г.). «Использование РНК-полимеразы бактериофага Т7 для управления селективной высокоуровневой экспрессией клонированных генов». Журнал молекулярной биологии. 189 (1): 113–30. Дои:10.1016/0022-2836(86)90385-2. PMID 3537305.
  2. ^ а б Ноэль Р.Дж., Резникофф В.С. (10 марта 2000 г.). «Структурные исследования взаимодействий lacUV5-РНК-полимеразы in vitro». Журнал биологической химии. 275 (11): 7708–7712. Дои:10.1074 / jbc.275.11.7708.
  3. ^ Прибнов, Д (1975). «Ранние промоторы бактериофага Т7: нуклеотидные последовательности двух сайтов связывания РНК-полимеразы». Журнал молекулярной биологии. 99 (3): 419–443. Дои:10.1016 / S0022-2836 (75) 80136-7.
  4. ^ Сильверстоун, AE; Ардитти, Р.Р .; Магасаник Б (июль 1970 г.). «Катаболиты-нечувствительные ревертанты мутантов lac-промотора». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 66 (3): 773–9. Bibcode:1970ПНАС ... 66..773С. Дои:10.1073 / pnas.66.3.773. ЧВК 283117. PMID 4913210.
  5. ^ Фуллер, Ф (1982). «Семейство клонирующих векторов, содержащих промотор lacUV5». Ген. 19 (1): 43–54. Дои:10.1016/0378-1119(82)90187-1. PMID 6292048.
  6. ^ «Хромосома штамма Escherichia coli BLR (DE3), полный геном». GenBank. 2017-04-13. Получено 21 апреля 2019.
  7. ^ «Хромосома штамма Escherichia coli BLR (DE3), LacZ». GenBank. Получено 21 апреля 2019.