WikiDer > Микромассив олигонуклеотидов, специфичных для метилирования

Methylation specific oligonucleotide microarray

Микромассив олигонуклеотидов, специфичных для метилирования, также известный как Микрочип MSO, был разработан как метод отображения эпигенетическое метилирование изменения в ДНК из рак клетки.[1]

Общий процесс начинается с модификации ДНК с помощью бисульфит, специально для преобразования неметилированный цитозин в CpG сайты к урацилу, оставляя метилированный цитозины нетронутые.[1] Интересующий модифицированный участок ДНК амплифицируется с помощью ПЦР и во время этого процесса урацилы превращаются в тимин. В ампликоны помечены флуоресцентный краситель и гибридизирован с олигонуклеотидом зонды которые закреплены на предметном стекле.[2] Зонды по-разному связываются с остатками цитозина и тимина, что в конечном итоге позволяет различать метилированные и неметилированные сайты CpG соответственно.[1]

Строится калибровочная кривая и сравнивается с результатами на микрочипе амплифицированных образцов ДНК. Это позволяет в целом количественно оценить долю метилирования, присутствующего в интересующей области.[3]

Этот метод микроматрицы был разработан Тимом Хуэй-Мин Хуанг и его лабораторией и был официально опубликован в 2002 году.[1]

диаграмма микроматрицы олигонуклеотидов, специфичных для метилирования, которая будет использоваться для построения калибровочной кривой
Пример диаграммы микрочипа MSO, который будет использоваться для построения калибровочной кривой

Значение для исследований рака

Рак клетки часто развиваются атипично метилирование шаблоны, на CpG сайты в покровителях гены-супрессоры опухолей. Высокий уровень метилирования на промоторе приводит к подавлению регуляции соответствующих генов и характерен для канцерогенез. Это одно из наиболее устойчивых изменений, наблюдаемых в опухолевых клетках на ранних стадиях.[1] Микромассив олигонуклеотидов, специфичных для метилирования, позволяет с высоким разрешением и высокой пропускной способностью обнаруживать многочисленные события метилирования на промоторах нескольких генов. Следовательно, этот метод может использоваться для обнаружения аберрантного метилирования в промоторах супрессоров опухолей на ранней стадии и был использован при раке желудка, толстой кишки и многих других.[4][5] Поскольку он позволяет обнаруживать наличие атипичных метилирований в раковых клетках, его также можно использовать для выявления основной причины злокачественного новообразования, будь то мутации в хромосомах или эпигенетические модификации, а также уровни транскрипции генов-супрессоров опухолей. под действием.[2][6] Интересное использование этого микроматрицы включает в себя специфическую классификацию рака, основанную только на паттернах метилирования, например, различение классов лейкемия, предполагая, что разные классы рака демонстрируют относительно уникальные паттерны метилирования.[7] Этот метод также был предложен для мониторинга лечение рака, которое включает изменение паттернов метилирования в мутантных раковых клетках.[2]

Рекомендации

  1. ^ а б c d е Gitan RS, Shi H, Chen CM, Yan PS, Huang TH (январь 2002 г.). «Микроматрица специфических для метилирования олигонуклеотидов: новый потенциал для высокопроизводительного анализа метилирования». Геномные исследования. 12 (1): 158–64. Дои:10.1101 / гр.202801. ЧВК 155260. PMID 11779841.
  2. ^ а б c Ши Х, Майер С., Ниммрих И., Ян П.С., Колдуэлл CW, Олек А., Хуанг Т.Х. (январь 2003 г.). «Микроматрица на основе олигонуклеотидов для анализа метилирования ДНК: принципы и приложения». Журнал клеточной биохимии. 88 (1): 138–43. Дои:10.1002 / jcb.10313. PMID 12461783. S2CID 41907903.
  3. ^ Ян П.С., Вэй Ш., Хуан Т.Х. (2004). "Метилирование-специфический олигонуклеотидный микрочип". В Толлефсбол ТО (ред.). Протоколы эпигенетики. Методы молекулярной биологии. 287. Humana Press. С. 251–60. Дои:10.1385/1-59259-828-5:251. ISBN 9781592598281. PMID 15273417.
  4. ^ Хоу П, Шен Джи, Джи МДж, Хе Нью-Йорк, Лу Чж (декабрь 2004 г.). «Метод на основе микрочипов для обнаружения изменений метилирования 5'-CpG-островков гена p16 (Ink4a) в карциномах желудка». Всемирный журнал гастроэнтерологии. 10 (24): 3553–8. Дои:10.3748 / wjg.v10.i24.3553. ЧВК 4611991. PMID 15534905.
  5. ^ Mund C, Beier V, Bewerunge P, Dahms M, Lyko F, ​​Hoheisel JD (апрель 2005 г.). «Матричный анализ паттернов метилирования геномной ДНК промотора гена супрессора опухолей p16INK4A в клеточных линиях карциномы толстой кишки». Исследования нуклеиновых кислот. 33 (8): e73. Дои:10.1093 / nar / gni072. ЧВК 1087791. PMID 15860770.
  6. ^ Ю. Ю., Паранджпе С., Нельсон Дж., Финкельштейн С., Рен Б., Коккинакис Д. и др. (Февраль 2005 г.). «Высокопроизводительный скрининг статуса метилирования генов при раке простаты с использованием массива метилирования олигонуклеотидов». Канцерогенез. 26 (2): 471–9. Дои:10.1093 / carcin / bgh310. PMID 15485992.
  7. ^ Адорьян П., Дистлер Дж., Липшер Э., Модель F, Мюллер Дж., Пелет С. и др. (Март 2002 г.). «Прогнозирование и обнаружение класса опухоли с помощью анализа метилирования ДНК на основе микрочипов». Исследования нуклеиновых кислот. 30 (5): 21e – 21. Дои:10.1093 / nar / 30.5.e21. ЧВК 101257. PMID 11861926.

внешняя ссылка