WikiDer > Наноразмерная масс-спектрометрия вторичных ионов

Nanoscale secondary ion mass spectrometry

Наноразмерная масс-спектрометрия вторичных ионов (nanoSIMS) представляет собой аналитический метод, используемый для сбора результатов измерений элементного и изотопного состава материала с наноразмерным разрешением с использованием секторный масс-спектрометр. Этот инструмент основан на вторично-ионная масс-спектрометрия.[1] NanoSIMS может создавать наноразмерные карты элементного состава, параллельное получение семи масс, изотопная идентификация, сочетающий в себе высокое массовое разрешение, частей на миллион чувствительность обычной ВИМС с пространственным разрешением до 50 нм и быстрым захватом.[2]

Упрощенная схема прибора NanoSims50.

NanoSIMS относится не только к используемому методу, но и к масс-спектрометру, специально предназначенному для этого метода. Оригинальный дизайн инструмента был разработан Жоржем Слодзяном из Университета Париж-Юг во Франции.[3] В настоящее время в мире существует более 40 приборов NanoSIMS.[4]

Как это устроено

Как правило, NanoSIMS использует ионную пушку для создания первичного пучка ионов. Эти первичные ионы разрушают поверхность образца и вызывают атомные столкновения, некоторые из которых приводят к высвобождению вторичных ионных частиц. Эти ионы передаются через масс-спектрометр, где измеряются и идентифицируются массы.[5] Пучок первичных ионов может растрироваться по образцу и создавать «карту» распределения элементов и изотопов путем подсчета количества ионов, которые возникли из каждой точки, с разрешением до 50 нанометров (нм), что в 10-50 раз больше, чем у обычных SIMS.[6][7] Это достигается за счет размещения первичного зонда в непосредственной близости от образца.[8] Пучок первичных ионов воздействует на поверхность образца под углом 90 °, а вторичные ионы выводятся обратно через ту же линзу, что позволяет различать изотопный состав отдельных ячеек в частях на миллион (ppm) или частях на миллиард (ppb). классифицировать.

NanoSIMS может обнаруживать мельчайшие различия масс между ионами с разрешением M / dM> 5000, где M - номинальная масса изотопа, а dM - разница масс между интересующими изотопами.[9] Возможности NanoSIMS с высоким разрешением по массе позволяют идентифицировать и наносить на карту различные элементы и их изотопы в образце, даже если они очень близки по массе. Масс-спектрометр способен к мультиколлекции, то есть до 5 (NanoSIMS 50) или 7 (NanoSIMS 50 L) масс могут быть одновременно обнаружены, от водорода до урана, хотя и с ограничениями.[5][7] Относительно большое количество масс помогает устранить ошибки измерения, так как предотвращаются возможные изменения в условиях прибора или образца, которые могут произойти между прогонами.[9]

Ионный пучок должен быть настроен на обнаружение отрицательных или положительных ионов, обычно с использованием пучка цезия + или кислорода соответственно.[10] Это высокое массовое разрешение особенно актуально для биологических применений. Например, азот - один из самых распространенных элементов в организмах. Однако из-за низкого сродства атома азота к электрону образование вторичных ионов происходит редко. Вместо этого можно генерировать и измерять такие молекулы, как CN. Однако из-за комбинаций изотопов (таких как изобары 13C14N- и 12C15N-), будут получены почти идентичные молекулярные массы 27000 и 27,006 дальтон соответственно. В отличие от других методов визуализации, где 13C14N и 12C15N невозможно измерить независимо из-за почти одинаковых масс, NanoSIMS может безопасно различать различия между этими молекулами.[10]

Физика NanoSIMS

Масс-спектрометр с магнитным сектором вызывает физическое разделение ионов разных отношение массы к заряду. Физическое разделение вторичных ионов вызвано Сила Лоренца когда ионы проходят через магнитное поле, перпендикулярное вектору скорости вторичных ионов. В Сила Лоренца утверждает, что частица будет испытывать силу

когда он поддерживает заряд q и путешествует через электрическое поле E и магнитное поле B со скоростью vВторичные ионы, покидающие поверхность образца, обычно имеют кинетическая энергия из нескольких электрон-вольт (эВ), хотя было обнаружено, что довольно небольшая часть имеет энергию в несколько кэВ. An электростатическое поле захватывает вторичные ионы, покидающие поверхность образца; эти извлеченные ионы затем переносятся в масс-спектрометр. Чтобы добиться точного изотоп измерений, существует потребность в высоком пропускании и высоком массовое разрешение. Высокое пропускание означает низкие потери вторичных ионов между поверхностью образца и детектором, а высокое разрешение по массе относится к способности эффективно отделять вторичные ионы (или представляющие интерес молекулы) от других ионов и / или ионов схожей массы. Первичные ионы будут сталкиваться с поверхностью с определенной частотой на единицу площади поверхности. В результате столкновения атомы разбрызгиваются с поверхности образца, и лишь небольшая часть этих атомов подвергается ионизации. Они становятся вторичными ионами, которые затем обнаруживаются после передачи через масс-спектрометр. Каждый первичный ион генерирует некоторое количество вторичных ионов изотопа, которые достигают детектора для подсчета. В скорость счета определяется

куда я(яM) - скорость счета изотопа яM элемента M. Скорость счета изотопа зависит от концентрации, ИксM и элемент изотопное содержание, обозначенный Ая. Поскольку первичный ионный пучок определяет вторичные ионы, Y, которые распыляются, плотность первичного ионного пучка, dб, который определяется как количество ионов в секунду на единицу площади поверхности, будет влиять на часть площади поверхности образца, S, с равномерным распределением первичных ионов. Из распыленных вторичных ионов только часть будет ионизирована, Yя. Вероятность того, что любой ион будет успешно перенесен от масс-спектрометра к детектору, составляет Т. Продукт Yя и Т определяет количество изотопов, которые будут ионизированы, а также обнаружены, поэтому это считается полезным выходом.[11]

Базовые приготовления

Одним из наиболее важных шагов при использовании NanoSIMS является подготовка образца.[12] Для отдельных экспериментов необходимо разработать специальные протоколы, чтобы наилучшим образом сохранить истинное пространственное распределение и количество молекул на основе образца. Как правило, из-за конструкции машины NanoSIMS образец должен быть совместимым с вакуумом (т. Е. Не содержать летучих веществ), плоским, что уменьшает изменение траекторий ионизации, и проводящим, что может быть выполнено напылением с использованием Au, Ir или C. Биологические образцы, такие как клетки или ткани, могут быть зафиксированы и залиты смолой перед разрезанием на срезы 100 нм и помещены на силиконовые чипы или слайды перед просмотром.[12]

Приложения

NanoSIMS может фиксировать пространственную изменчивость изотопных и элементных измерений субмикронных областей, зерен или включений из геологических и биологических образцов.[13] Этот инструмент может характеризовать наноструктурированные материалы со сложным составом, которые становятся все более важными кандидатами для производства и хранения энергии.

Геологические приложения

NanoSIMS был впервые использован в ЭТОМ ИССЛЕДОВАНИИ.

NanoSIMS также оказался полезным при изучении космохимический проблемы, когда образцы единичных зерен, зерен микрометрового или субмикронного размера из метеоритов, а также микротом разделы, подготовленные сфокусированный ионный пучок (FIB) можно проанализировать. NanoSIMS можно комбинировать с просвечивающая электронная микроскопия (ТЕМ) при использовании микротома или секций FIB. Эта комбинация позволяет проводить коррелированные минералогические и изотопные исследования. на месте в субмикрометровом масштабе.

Он особенно полезен при исследовании материалов из-за его высокой чувствительности при высоком разрешении по массе, что позволяет получать изображения и количественную оценку следовых элементов.[14]

Биологические приложения

Изначально разработанная для геохимических и связанных с ними исследований, NanoSIMS сейчас используется в самых разных областях, включая биологию и микробиологию. В биомедицинских исследованиях NanoSIMS также называют мультиизотопной масс-спектрометрией (MIMS).[15] Разрешение 50 нм обеспечивает беспрецедентное разрешение клеточных и субклеточных характеристик (в качестве эталона модельный организм Кишечная палочка обычно составляет от 1000 до 2000 нм в диаметре). Высокое разрешение, которое он предлагает, позволяет внутриклеточный измерение скоплений и потоков молекул, содержащих различные стабильные изотопы.[16] NanoSIMS можно использовать для чистых культур, совместных культур и образцов смешанных сообществ.[9]

Впервые NanoSIMS в биологии использовали Петерандерл и Лечен в 2004 году, которые использовали прототип NanoSIMS для исследования и измерения изотопов углерода и азота в эукариотических клетках. Это исследование было первым случаем, когда соотношения изотопов углерода и азота были непосредственно измерены на субклеточном уровне в биологическом образце.[17]

Методы, обычно связанные с NanoSIMS

Микроскопия

Другие методы микроскопии обычно используются в тандеме с NanoSIMS, что позволяет получать несколько типов информации (например, таксономическую информацию через флуоресценция на месте гибридизация (РЫБЫ)[18] или определение дополнительных физиологических особенностей через просвечивающая электронная микроскопия (ТЕА)) будет предоставлено.

Маркировка иммунного золота

Традиционные методы, которые используются для мечения и идентификации субклеточных свойств клеток, такие как мечение иммунным золотом, также могут использоваться с анализом NanoSIMS. Маркировка Immunogold использует антитела для нацеливания на определенные белки, а затем маркирует антитела наночастицами золота. Инструмент NanoSIMS может обнаруживать частицы золота, обеспечивая местоположение меченых белков с высоким разрешением. Золотосодержащие или платиносодержащие соединения, используемые в качестве противоопухолевых препаратов, были визуализированы с помощью NanoSIMS для изучения субклеточного распределения в клетках рака молочной железы и рака толстой кишки соответственно.[19] В отдельном исследовании изучалось связывание антитела с антигеном без необходимости добавления флуоресцентной метки к антителу, что позволило провести локализацию без метки и провести количественный анализ с высоким разрешением.[20]

Маркировка стабильных изотопов

Анализ NanoSIMS диатомовых водорослей и бактерий (белая стрелка), снабженных стабильным изотопом, помеченным 15N нитрат. На панелях а-е темно-синий цвет представляет низкие количества каждого изотопа, а желтый - высокие количества. Бактерии, но не диатомовые водоросли, включали тяжелые 15N, как видно на панели c. Естественный 15N к 14Коэффициент N составляет 0,04. Любое соотношение выше этого указывает на то, что организм включил 15N нитрат в их органическое вещество. Естественные различия в 32Также можно увидеть изобилие S между бактериями и диатомовыми водорослями (панель d), а также 28Сигнал Si панциря диатомовой водоросли, состоящей из кремнезема (панель e). Панель f представляет собой флуоресценцию той же диатомовой водоросли. Красное поле указывает на тот же вид, что и на панелях a-e. Каждое изображение nanoSIMS имеет размер 50 мкм на 50 мкм. Изображение предоставлено Международным учебным курсом по геобиологии и лабораторией для сирот Калифорнийского технологического института.

Другой распространенный метод, обычно используемый в анализе NanoSIMS, - это исследование стабильных изотопов. Этот метод включает введение устойчивых изотопно меченых биологически значимых соединений в организм для потребления и интеграции в органическое вещество. При анализе с помощью NanoSIMS этот метод называется nanoSIP.[21] NanoSIMS можно использовать для определения того, какие организмы включили какие молекулы, сколько меченых молекул было включено полуколичественным способом и где в клетке произошло включение. Предыдущие методы количественного анализа с более низким разрешением, чем NanoSIMS, стабильных меченых изотопами молекул были ограничены анализируемым сыпучим материалом, что не позволяло получить представление о вкладе отдельных клеток или субклеточных компартментов.[22] Кроме того, удаление крупных чужеродных молекул (таких как антитела или частицы золота) из экспериментальной установки снимает опасения, что меченые молекулы, необходимые для других методов микроскопии, могут иметь биохимические реакции или свойства, отличные от обычных.

Этот метод можно использовать для изучения обмена питательных веществ. Микробиом кишечника мыши исследовали, чтобы определить, какие микробы питаются соединениями, производными от хозяина. Для этого мышам давали корм, обогащенный стабильными изотопно-меченными аминокислотами, и исследовали микробную биомассу.[23] NanoSIMS позволяет исследовать метаболический вклад отдельных микробов. NanoSIMS была использована для изучения и впервые доказательств способности бактерий и архей фиксировать азот из глубин океана путем снабжения 15N азот содержит соединения в образцах донных отложений.[24] NanoSIMS также может использоваться для оценки скорости роста организмов, поскольку количество углерода или другого субстрата, накопленного внутри клетки, позволяет оценить, сколько биомассы генерируется.[25]

Измерение естественного содержания изотопов в организмах

Органический материал, естественно, содержит стабильные изотопы в различных соотношениях в окружающей среде, что может предоставить информацию о происхождении источника пищи для организмов. Различные типы органических материалов источников пищи имеют разное количество стабильных изотопов, что отражается на составе организма, который потребляет эти источники пищи.[26] Этот тип анализа был впервые использован в 2001 г. совместно с FISH для изучения синтрофических отношений между анаэробными метанокисляющими археями и сульфатредуцирующими бактериями.[27] Изотопы с низким естественным содержанием могут быть не обнаружены этим методом.

Палеобиология

NanoSIMS также можно использовать для изучения элементного и изотопного состава микрочастиц, сохранившихся в летописи горных пород.[6] Типы элементов и изотопные отношения могут помочь определить, имеет ли материал биологическое происхождение.[9] NanoSIMS был впервые использован в этой области палеобиологии в 2005 году Робертом и др.[28] В этом исследовании было обнаружено, что микрофоссилии содержат элементы углерода, азота и серы, расположенные в виде «глобул», напоминающих клеточные стенки. Измеренное отношение углерода к азоту также служило индикатором биологического происхождения, поскольку порода, окружающая окаменелости, имела очень разные отношения C к N.[6]

Рекомендации

  1. ^ Herrmann, Anke M .; Ритц, Карл; Нунан, Наойс; Clode, Peta L .; Петт-Ридж, Дженнифер; Килберн, Мэтт Р .; Мерфи, Дэниел В .; О’Доннелл, Энтони Дж .; Стокдейл, Элизабет А. (2007). «Наномасштабная вторичная ионная масс-спектрометрия - новый аналитический инструмент в биогеохимии и экологии почв: обзорная статья». Биология и биохимия почвы. 39 (8): 1835–1850. Дои:10.1016 / j.soilbio.2007.03.011. ISSN 0038-0717.
  2. ^ Cameca NanoSIMS 50L
  3. ^ «CAMECA NanoSIMS: ионный микрозонд высокого разрешения для сверхтонкого анализа». www.cameca.com. Получено 20 апреля, 2016.
  4. ^ Нуньес, Дж., Ренслоу, Р., Клифф, Дж. Б., и Андертон, К. Р. (2018). NanoSIMS для биологических приложений: Текущая практика и анализ. Биоинтерфазы, 13 (3), 03B301. https://doi.org/10.1116/1.4993628
  5. ^ а б "наносимс: Introduction_to_nanosims [наносимс-вики]". nanosims.geo.uu.nl. Получено 2020-05-22.
  6. ^ а б c Oehler, Dorothy Z .; Кэди, Шерри Л. (декабрь 2014 г.). «Биогенность и сингенность органического вещества в древних осадочных породах: последние достижения в поисках свидетельств прошлой жизни». Вызовы. 5 (2): 260–283. Bibcode:2014Чел ... 5..260O. Дои:10.3390 / Challe5020260.
  7. ^ а б Килберн, Мэтт Р .; Уэйси, Дэвид (2014). ГЛАВА 1 Наноразмерная масс-спектрометрия вторичных ионов (NanoSIMS) как аналитический инструмент в науках о Земле. Наука обнаружения. С. 1–34. Дои:10.1039/9781782625025-00001. ISBN 978-1-84973-649-7.
  8. ^ Килберн, Мэтт Р .; Уэйси, Дэвид (2014). «ГЛАВА 1 Наноразмерная масс-спектрометрия вторичных ионов (NanoSIMS) как аналитический инструмент в науках о Земле»: 1–34. Дои:10.1039/9781782625025-00001. Цитировать журнал требует | журнал = (помощь)
  9. ^ а б c d Нуньес, Джейми; Ренслоу, Райан; Клифф, Джон Б.; Андертон, Кристофер Р. (27.09.2017). «NanoSIMS для биологических приложений: современные методы и анализ». Биоинтерфазы. 13 (3): 03B301. Дои:10.1116/1.4993628. ISSN 1934-8630. PMID 28954518.
  10. ^ а б Джингард, Фрэнк; Л. Штайнхаузер, Мэтью (2019). «Биологические исследования с наноразмерной масс-спектрометрией вторичных ионов». Журнал аналитической атомной спектрометрии. 34 (8): 1534–1545. Дои:10.1039 / C9JA00171A.
  11. ^ Хоппе, Питер; Коэн, Стефани; Мейбом, Андерс (2013). «NanoSIMS: технические аспекты и приложения в космохимии и биологической геохимии». Геостандарты и геоаналитические исследования. 37 (2): 111–154. Дои:10.1111 / j.1751-908X.2013.00239.x.
  12. ^ а б Grovenor, C.R.M .; Смарт, К. Э .; Kilburn, M. R .; Шор, В .; Dilworth, J. R .; Martin, B .; Hawes, C .; Рикаби, Р. Э. М. (30 июля 2006 г.). «Подготовка образцов для анализа биологических материалов NanoSIMS». Прикладная наука о поверхности. Труды пятнадцатой международной конференции по масс-спектрометрии вторичных ионов. 252 (19): 6917–6924. Bibcode:2006ApSS..252.6917G. Дои:10.1016 / j.apsusc.2006.02.180. ISSN 0169-4332.
  13. ^ Дж. Моро и др., SCIENCE.
  14. ^ «Применение CAMECA NanoSIMS для исследования материалов: сегрегация и диффузия в поликристаллических материалах». www.cameca.com.
  15. ^ Steinhauser, Matthew L .; Лечен, Клод П. (2013). «Количественная визуализация субклеточного метаболизма с помощью стабильных изотопов и мультиизотопная визуализация масс-спектрометрии». Семинары по клеточной биологии и биологии развития. 24 (8–9): 661–667. Дои:10.1016 / j.semcdb.2013.05.001. ISSN 1084-9521. ЧВК 3985169. PMID 23660233.
  16. ^ «Применение CAMECA NanoSIMS: клеточная биология». www.cameca.com.
  17. ^ Peteranderl, R .; Лечен, К. (2004-04-01). «Измерение соотношения стабильных изотопов углерода и азота в культивируемых клетках». Журнал Американского общества масс-спектрометрии. 15 (4): 478–485. Дои:10.1016 / j.jasms.2003.11.019. ISSN 1044-0305. PMID 15047053.
  18. ^ Musat, N .; Halm, H .; Винтерхоллер, В .; Hoppe, P .; Peduzzi, S .; Hillion, F .; Horreard, F .; Amann, R .; Jorgensen, B. B .; Кайперс, М. М. М. (2008). «Одноклеточный взгляд на экофизиологию анаэробных фототрофных бактерий». Труды Национальной академии наук. 105 (46): 17861–17866. Bibcode:2008ПНАС..10517861М. Дои:10.1073 / pnas.0809329105. ISSN 0027-8424. ЧВК 2582579. PMID 19004766.
  19. ^ Wedlock, Луиза Э .; Килберн, Мэтт Р .; Клифф, Джон Б.; Филгейра, Луис; Сондерс, Мартин; Бернерс-Прайс, Сьюзан Дж. (30 августа 2011 г.). «Визуализация золота внутри опухолевых клеток после лечения противоопухолевым комплексом золота (I)». Металломика. 3 (9): 917–925. Дои:10.1039 / C1MT00053E. ISSN 1756-591X. PMID 21796317.
  20. ^ Дауфас, Стефани; Дели, Томас; Лавастр, Оливье; Корлу, Энн; Гуген-Гийузо, Кристиан; Абабу-Жирар, Сорайя; Geneste, Флоренция (2008). «Локализация и количественный анализ связывания антиген-антитело на 2D-субстрате с использованием визуализации NanoSIMS». Аналитическая химия. 80 (15): 5958–5962. Дои:10.1021 / ac800602q. ISSN 0003-2700. PMID 18578503.
  21. ^ Петт-Ридж, Дженнифер; Вебер, Питер К. (2012). «NanoSIP: приложения NanoSIMS для микробной биологии». Биология микробных систем. Методы молекулярной биологии (Клифтон, Нью-Джерси). 881. С. 375–408. Дои:10.1007/978-1-61779-827-6_13. ISBN 978-1-61779-826-9. ISSN 1940-6029. PMID 22639220.
  22. ^ Jiang, H .; Favaro, E .; Goulbourne, C.N .; Rakowska, P.D .; Hughes, G.M .; Ряднов, М. Г .; Fong, L.G .; Янг, С. Г .; Ferguson, D. J. P .; Harris, A. L .; Гровенор, К. Р. М. (01.07.2014). «Визуализация стабильных изотопов биологических образцов с помощью масс-спектрометрии вторичных ионов высокого разрешения и дополнительных методов». Методы (Сан-Диего, Калифорния).. 68 (2): 317–324. Дои:10.1016 / j.ymeth.2014.02.012. ISSN 1046-2023. ЧВК 4222523. PMID 24556558.
  23. ^ Берри, Дэвид; Stecher, Bärbel; Шинтлмейстер, Арно; Райхерт, Йохен; Бругиру, Сандрин; Вайлд, Биргит; Ванек, Вольфганг; Рихтер, Андреас; Раух, Изабелла; Декер, Томас; Лой, Александр (19 марта 2013 г.). «Кормление соединений-хозяев кишечной микробиотой, выявленное с помощью исследования стабильных изотопов одной клетки». Труды Национальной академии наук. 110 (12): 4720–4725. Bibcode:2013ПНАС..110.4720Б. Дои:10.1073 / pnas.1219247110. ISSN 0027-8424. ЧВК 3607026. PMID 23487774.
  24. ^ Декас, Энн Э .; Порецкий, Рэйчел С .; Сирота, Виктория Дж. (2009-10-16). «Глубоководные археи фиксируют и распределяют азот в консорциумах потребляющих метан микробов». Наука. 326 (5951): 422–426. Bibcode:2009Sci ... 326..422D. Дои:10.1126 / science.1178223. ISSN 0036-8075. PMID 19833965.
  25. ^ Стриганюк, Григорий; Калабрезе, Федерика; Кюммель, Штеффен; Мусат, Флорин; Richnow, Hans H .; Мусат, Никулина (2018). «Расчет скорости ассимиляции отдельных клеток на основе соотношений изотопов, полученных из SIP-NanoSIMS: комплексный подход». Границы микробиологии. 9: 2342. Дои:10.3389 / fmicb.2018.02342. ISSN 1664-302X. ЧВК 6178922. PMID 30337916.
  26. ^ Филлипс, Дональд Л. (30 апреля 2012 г.). «Преобразование значений изотопов в состав рациона: использование моделей смешивания». Журнал маммологии. 93 (2): 342–352. Дои:10.1644 / 11-МАММ-С-158.1. ISSN 0022-2372.
  27. ^ Сирота, Виктория Дж .; Дом, Кристофер Х .; Хинрикс, Кай-Уве; МакКиган, Кевин Д.; Делонг, Эдвард Ф. (2001-07-20). "Археи, потребляющие метан, выявлены с помощью прямого изотопного и филогенетического анализа". Наука. 293 (5529): 484–487. Дои:10.1126 / science.1061338. ISSN 0036-8075. PMID 11463914.
  28. ^ Oehler, D. Z .; Mostefaoui, S .; Мейбом, А .; Село, М .; McKay, D. S .; Роберт Ф. (март 2006 г.). ""Нано «Морфология и признаки элементов ранней жизни на Земле: новый инструмент для оценки биогенности». LPI: 1067. Bibcode:2006LPI .... 37.1067O.