WikiDer > Векторы в генной терапии

Vectors in gene therapy
Как векторы работают для передачи генетического материала

Генная терапия использует доставку ДНК в клетки, которая может быть достигнута несколькими методами, кратко изложенными ниже. Двумя основными классами методов являются методы, использующие рекомбинантные вирусы (иногда называемые биологическими наночастицами или вирусными векторами), и методы, в которых используется «голая» ДНК или комплексы ДНК (невирусные методы).

Вирусы

Основная статья: Вирусный вектор

Все вирусы связываются со своими хозяевами и вводят свой генетический материал в хозяйскую клетку как часть своего цикла репликации. Этот генетический материал содержит базовые «инструкции» о том, как производить больше копий этих вирусов, взламывая нормальные производственные механизмы организма для удовлетворения потребностей вируса. Клетка-хозяин будет выполнять эти инструкции и производить дополнительные копии вируса, что приводит к заражению все большего числа клеток. Некоторые типы вирусов вставляют свой геном в цитоплазму хозяина, но фактически не проникают в клетку. Другие проникают через клеточную мембрану, замаскированные под белковые молекулы, и проникают в клетку.

Выделяют два основных типа вирусной инфекции: литический и лизогенный. Вскоре после встраивания ДНК вирусы литического цикла быстро производят больше вирусов, вырываются из клетки и заражают больше клеток. Лизогенные вирусы интегрируют свою ДНК в ДНК клетки-хозяина и могут жить в организме многие годы, прежде чем сработают триггеры. Вирус воспроизводится так же, как и клетка, и не причиняет телесных повреждений, пока не сработает. Триггер высвобождает ДНК из ДНК хозяина и использует ее для создания новых вирусов.[нужна цитата]

Ретровирусы

Генетический материал в ретровирусы в форме РНК молекул, в то время как генетический материал их хозяев находится в форме ДНК. Когда ретровирус заражает клетку-хозяин, он вводит свою РНК вместе с некоторыми ферментами, а именно обратной транскриптазой и интегрировать, в камеру. Эта молекула РНК из ретровируса должна произвести копию ДНК из своей молекулы РНК, прежде чем она сможет быть интегрирована в генетический материал клетки-хозяина. Процесс создания копии ДНК из молекулы РНК называется обратная транскрипция. Это осуществляется одним из ферментов вируса, который называется обратная транскриптаза. После того, как эта копия ДНК произведена и свободна в ядро клетки-хозяина, он должен быть включен в геном клетки-хозяина. То есть он должен быть вставлен в большие молекулы ДНК в клетке (хромосомы). Этот процесс осуществляется другим ферментом вируса, который называется интегрировать.[нужна цитата]

Теперь, когда генетический материал вируса вставлен, можно сказать, что клетка-хозяин была модифицирована, чтобы содержать новые гены. Если эта хозяйская клетка позже разделится, все ее потомки будут содержать новые гены. Иногда гены ретровируса не сразу выражают свою информацию.[нужна цитата]

Одна из проблем генной терапии с использованием ретровирусов состоит в том, что фермент интеграза может вставлять генетический материал вируса в любое произвольное положение в геноме хозяина; он случайным образом вставляет генетический материал в хромосому. Если генетический материал окажется в середине одного из исходных генов клетки-хозяина, этот ген будет нарушен (инсерционный мутагенез). Если ген является одним из регулирующих деление клетки, неконтролируемое деление клетки (т.е. рак) может случиться. Эту проблему недавно начали решать с помощью нуклеазы цинковых пальцев[1] или путем включения определенных последовательностей, таких как область контроля локуса бета-глобина направить сайт интеграции к определенным хромосомным сайтам.

Испытания генной терапии с использованием ретровирусных векторов для лечения Х-сцепленного тяжелый комбинированный иммунодефицит (X-SCID) представляют собой наиболее успешное применение генной терапии на сегодняшний день. Более двадцати пациентов прошли курс лечения во Франции и Великобритании, при этом наблюдается высокий уровень восстановления иммунной системы. Подобные испытания были ограничены или остановлены в США, когда лейкемия сообщалось у пациентов, получавших лечение во французском исследовании генной терапии X-SCID.[2] На сегодняшний день у четырех детей, участвовавших в исследовании во Франции, и у одного ребенка в исследовании в Великобритании, развился лейкоз в результате инсерционного мутагенеза ретровирусным вектором. Все эти дети, кроме одного, хорошо ответили на обычное противолейкозное лечение. Испытания генной терапии для лечения ТКИН из-за дефицита аденозиндезаминазы (ADA) фермент (одна из форм SCID)[3] продолжают с относительным успехом в США, Великобритании, Ирландии, Италии и Японии.[нужна цитата]

Аденовирусы

Аденовирусы представляют собой вирусы, несущие свой генетический материал в виде двухцепочечной ДНК. Они вызывают респираторные, кишечные и глазные инфекции у человека (особенно простуду). Когда эти вирусы заражают хозяйскую клетку, они вводят в хозяина свою молекулу ДНК. Генетический материал аденовирусов не включен (преходящий) в генетический материал клетки-хозяина. Молекула ДНК остается свободной в ядре клетки-хозяина, и инструкции в этой дополнительной молекуле ДНК выполняются. записано как и любой другой ген. Единственное отличие состоит в том, что эти дополнительные гены не реплицируются, когда клетка приближается к клеточному делению, поэтому у потомков этой клетки не будет дополнительного гена.[нужна цитата]

В результате для лечения аденовирусом потребуется повторное введение в растущую популяцию клеток, хотя отсутствие интеграции в геном клетки-хозяина должно предотвратить тип рака, наблюдаемый в исследованиях SCID. Эта векторная система была продвинута для лечения рака и стала первым продуктом генной терапии, лицензированным для лечения рака. Гендицина, это аденовирус. Гендицин, аденовирус p53 на основе генная терапия была одобрена китайскими регулирующими органами в области пищевых продуктов и лекарств в 2003 году для лечения рака головы и шеи. Адвексин, аналогичный подход к генной терапии от Introgen, был отвергнут США. Управление по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) в 2008 году.[нужна цитата]

Опасения по поводу безопасности аденовирусных векторов возникли после смерти в 1999 г. Джесси Гелсингер при участии в испытании генной терапии. С тех пор работа с аденовирусными векторами была сосредоточена на генетически поврежденных версиях вируса.[нужна цитата]

Псевдотипирование белков оболочки вирусных векторов

Описанные выше вирусные векторы имеют естественные популяции клеток-хозяев, которые они инфицируют наиболее эффективно. Ретровирусы имеют ограниченный диапазон естественных клеток-хозяев, и хотя аденовирус и аденоассоциированный вирус способны эффективно инфицировать относительно более широкий круг клеток, некоторые типы клеток также устойчивы к заражению этими вирусами. Присоединение к чувствительной клетке и проникновение в нее опосредуется белковой оболочкой на поверхности вируса. Ретровирусы и аденоассоциированные вирусы имеют один белок, покрывающий их мембрану, в то время как аденовирусы покрыты как белком оболочки, так и волокнами, которые отходят от поверхности вируса. В белки оболочки на каждом из этих вирусов связываются с молекулы клеточной поверхности Такие как сульфат гепарина, что локализует их на поверхности потенциального хозяина, а также со специфическим рецептор белка который либо вызывает структурные изменения вирусного белка, способствующие проникновению, либо локализует вирус в эндосомы где подкисление просвет вызывает это рефолдинг вирусная оболочка. В любом случае проникновение в потенциальные клетки-хозяева требует благоприятного взаимодействия между белком на поверхности вируса и белком на поверхности клетки.[нужна цитата]

В целях генной терапии можно либо ограничить, либо расширить диапазон клеток, восприимчивых к трансдукции вектором генной терапии. С этой целью было разработано множество векторов, в которых эндогенные белки оболочки вируса были заменены либо белками оболочки из других вирусов, либо химерными белками. Такие химера будет состоять из тех частей вирусного белка, которые необходимы для включения в вирион, а также из последовательностей, предназначенных для взаимодействия со специфическими белками клетки-хозяина. Вирусы, в которых белки оболочки были заменены, как описано, называются псевдотипные вирусы. Например, наиболее популярным ретровирусным вектором для использования в исследованиях генной терапии был лентивирус Вирус обезьяньего иммунодефицита покрытые белками оболочки, G-белок, из Вирус везикулярного стоматита. Этот вектор называется VSV G-псевдотип лентивируса, и поражает почти универсальный набор клеток. Этот тропизм характерен для G-белка VSV, которым покрыт этот вектор. Было сделано много попыток ограничить тропизм вирусных векторов одной или несколькими популяциями клеток-хозяев. Этот прогресс позволил бы системное введение относительно небольшого количества вектора. Потенциал модификации нецелевых клеток будет ограничен, и многие опасения медицинского сообщества будут сняты. В большинстве попыток ограничить тропизм использовались химерные белки оболочки, несущие антитело фрагменты. Эти векторы показывают большие перспективы для разработки генной терапии «волшебной пули».[нужна цитата]

Репликационно-компетентные векторы

Компетентный к репликации вектор под названием ONYX-015 используется для репликации опухолевых клеток. Было обнаружено, что в отсутствие вирусного белка E1B-55Kd аденовирус вызывает очень быстрый апоптоз инфицированных p53 (+) клеток, что приводит к резкому сокращению потомства вируса и отсутствию последующего распространения. Апоптоз был главным образом результатом способности EIA инактивировать p300. В клетках p53 (-) делеция E1B 55kd не имеет последствий с точки зрения апоптоза, а репликация вируса аналогична репликации вируса дикого типа, что приводит к массовому уничтожению клеток.[нужна цитата]

Вектор с дефектом репликации удаляет некоторые важные гены. Эти удаленные гены все еще необходимы в организме, поэтому их заменяют либо вспомогательным вирусом, либо молекулой ДНК.[4]

Цис- и транс-действующие элементы

Векторы с дефектом репликации всегда содержат «конструкцию переноса». Конструкция для переноса несет ген, который необходимо трансдуцировать, или «трансген». Конструкция для переноса также несет последовательности, которые необходимы для общего функционирования вирусного генома: последовательность упаковки, повторы для репликации и, при необходимости, примирование обратной транскрипции. Это названные цис-действующие элементы, потому что они должны находиться на том же участке ДНК, что и вирусный геном и интересующий ген. Транс-действующие элементы - это вирусные элементы, которые могут быть закодированы на другой молекуле ДНК. Например, структурные белки вируса могут быть экспрессированы из другого генетического элемента, чем вирусный геном.[4]

Вирус простого герпеса

В Вирус простого герпеса - нейротропный вирус человека. В основном это исследуется на перенос генов в нервной системе. Вирус HSV-1 дикого типа способен инфицировать нейроны и уклоняться от иммунного ответа хозяина, но все же может реактивироваться и вызывать литический цикл репликации вируса. Таким образом, обычно используют мутантные штаммы HSV-1, которые не обладают способностью к репликации. Хотя латентный вирус не является очевидным с точки зрения транскрипции, он обладает специфическими для нейронами промоторами, которые могут продолжать нормально функционировать.[требуется дальнейшее объяснение] Антитела к ВПГ-1 распространены у людей, однако осложнения, вызванные герпетической инфекцией, довольно редки.[5] Следует проявлять осторожность в редких случаях энцефалита, и это дает некоторое обоснование для использования HSV-2 в качестве вирусного вектора, поскольку он обычно имеет тропизм для нейронных клеток, иннервирующих урогенитальную область тела, и может затем избавить хозяина от тяжелой патологии в мозге .[нужна цитата]

Невирусные методы

Невирусные методы имеют определенные преимущества по сравнению с вирусными методами: простое крупномасштабное производство и низкая иммуногенность хозяина - всего два. Ранее низкие уровни трансфекция и экспрессия гена в невыгодном положении находились невирусные методы; однако недавние достижения в области векторной технологии позволили получить молекулы и методы с эффективностью трансфекции, аналогичной эффективности вирусов.[6]

Инъекция голой ДНК

Это самый простой метод невирусной трансфекции. Клинические испытания внутримышечной инъекции голая ДНК плазмида произошла с некоторым успехом; однако экспрессия была очень низкой по сравнению с другими методами трансфекции. Помимо испытаний с плазмидами, были испытания с голым ПЦР продукт, которые имели аналогичный или больший успех. Поглощение обнаженной ДНК клетками обычно неэффективно. Исследовательские усилия, направленные на повышение эффективности поглощения голой ДНК, привели к появлению нескольких новых методов, таких как электропорация, сонопорация, и использование "генная пушка", который выбрасывает покрытые ДНК частицы золота в клетку с помощью газа под высоким давлением.[7]

Физические методы для улучшения доставки

Электропорация

Электропорация это метод, который использует короткие импульсы высокого напряжения для переноса ДНК через клеточную мембрану. Считается, что этот шок вызывает временное образование пор в клеточной мембране, позволяя молекулам ДНК проходить сквозь них. Электропорация обычно эффективна и работает с широким спектром типов клеток. Однако высокая скорость гибели клеток после электропорации ограничивает его использование, в том числе в клинических условиях.

Совсем недавно новый метод электропорации, названный электронно-лавинной трансфекцией, был использован в экспериментах по генной терапии. Используя высоковольтный плазменный разряд, ДНК эффективно доставлялась после очень коротких (микросекундных) импульсов. По сравнению с электропорацией этот метод привел к значительному повышению эффективности и меньшему повреждению клеток.

Генная пушка

Использование бомбардировки частицами или генная пушка, это еще один физический метод трансфекции ДНК. В этой технике, ДНК наносят на частицы золота и загружают в устройство, которое генерирует силу для достижения проникновения ДНК в клетки, в результате чего золота позади на «остановку» диск.

Сонопорация

Сонопорация использует ультразвуковые частоты для доставки ДНК в клетки. Считается, что процесс акустической кавитации разрушает клеточную мембрану и позволяет ДНК перемещаться в клетки.

Магнитофекция

В методе, называемом магнитофекцияДНК образует комплекс с магнитными частицами, и под чашку для культуры ткани помещают магнит, чтобы привести комплексы ДНК в контакт с монослоем клеток.

Гидродинамическая доставка

Гидродинамическая доставка включает быстрое введение большого объема раствора в сосудистую сеть (например, в нижняя полая вена, желчный проток, или хвостовая вена). Раствор содержит молекулы, которые нужно вставить в клетки, например: Плазмиды ДНК или миРНК, и переносу этих молекул в клетки способствует повышенное гидростатическое давление, вызванное большим объемом вводимого раствора.[8][9][10]

Химические методы для улучшения доставки

Олигонуклеотиды

Использование синтетических олигонуклеотидов в генной терапии предназначено для деактивации генов, участвующих в болезненном процессе. Есть несколько способов, которыми это достигается. Одна стратегия использует антисмысловой специфичен для целевого гена, чтобы нарушить транскрипцию дефектного гена. Другой использует небольшие молекулы РНК, называемые миРНК сигнализировать клетке о расщеплении определенных уникальных последовательностей в мРНК транскрипт дефектного гена, нарушающий трансляцию дефектной мРНК и, следовательно, экспрессию гена. Еще одна стратегия использует двухцепочечные олигодезоксинуклеотиды в качестве приманки для факторов транскрипции, которые необходимы для активации транскрипции целевого гена. Факторы транскрипции связываются с ловушками вместо промотора дефектного гена, что снижает транскрипцию целевого гена, снижая экспрессию. Кроме того, олигонуклеотиды одноцепочечной ДНК использовались для управления изменением одного основания в мутантном гене. Олигонуклеотид предназначен для отжига с комплементарностью к целевому гену, за исключением центрального основания, целевого основания, которое служит основой-матрицей для репарации. Этот метод называется репарацией гена, опосредованной олигонуклеотидами, направленной репарацией гена или целевым изменением нуклеотидов.

Липоплексы

Чтобы улучшить доставку новой ДНК в клетку, ДНК должна быть защищена от повреждений и иметь положительный заряд. Первоначально для построения липоплексов синтетических векторов использовали анионные и нейтральные липиды. Однако, несмотря на то, что с ними связана небольшая токсичность, что они совместимы с биологическими жидкостями и что существует возможность их адаптации к тканеспецифичности; их производство сложно и требует много времени, поэтому внимание было обращено на катионные версии.

Катионные липидыиз-за их положительного заряда были впервые использованы для конденсации отрицательно заряженных молекул ДНК, чтобы облегчить инкапсуляцию ДНК в липосомы. Позже было обнаружено, что использование катионных липидов значительно увеличивает стабильность липоплексов. Также в результате своего заряда катионные липосомы взаимодействуют с клеточной мембраной, эндоцитоз широко считается основным путем захвата липоплексов клетками. Эндосомы образуются в результате эндоцитоза, однако, если гены не могут быть выпущены в цитоплазму путем разрушения мембраны эндосомы, они будут отправлены в лизосомы, где вся ДНК будет разрушена, прежде чем они смогут выполнить свои функции. Было также обнаружено, что, хотя сами катионные липиды могут конденсировать и инкапсулировать ДНК в липосомы, эффективность трансфекции очень низка из-за отсутствия способности с точки зрения «эндосомального выхода». Однако при добавлении вспомогательных липидов (обычно электронейтральных липидов, таких как ДОФЭ) для образования липоплексов наблюдалась гораздо более высокая эффективность трансфекции. Позже было выяснено, что определенные липиды обладают способностью дестабилизировать эндосомные мембраны, чтобы облегчить выход ДНК из эндосомы, поэтому эти липиды называются фузогенными липидами. Хотя катионные липосомы широко использовались в качестве альтернативы векторам доставки генов, наблюдалась также дозозависимая токсичность катионных липидов, которая могла ограничивать их терапевтическое применение.

Чаще всего липоплексы используются для переноса генов в раковые клетки, где поставленные гены активируют гены, контролирующие опухолевые супрессоры, в клетке и снижают активность онкогенов. Недавние исследования показали, что липоплексы полезны при трансфекции респираторных заболеваний. эпителиальные клетки.

Полимерсомы

Полимерсомы синтетические версии липосомы (пузырьки с липидный бислой), сделано из амфифильный блок-сополимеры. Они могут инкапсулировать либо гидрофильный или гидрофобный содержимое и может использоваться для доставки в клетки груза, такого как ДНК, белки или лекарства. Преимущества полимерсом перед липосомами включают большую стабильность, механическую прочность, время циркуляции крови и емкость хранения.[11][12][13]

Полиплексы

Комплексы полимеров с ДНК называются полиплексами. Большинство полиплексов состоит из катионных полимеров, и их создание основано на самосборке за счет ионных взаимодействий. Одно важное различие между методами действия полиплексов и липоплексов состоит в том, что полиплексы не могут напрямую высвобождать свою ДНК-нагрузку в цитоплазму. В результате требовалась котрансфекция эндосомолитическими агентами, такими как инактивированный аденовирус, для облегчения выхода наночастиц из эндоцитарной везикулы, образовавшейся во время захвата частиц. Однако лучшее понимание механизмов, с помощью которых ДНК может ускользать от эндолизосомного пути, т.е. эффекта протонной губки,[14] инициировал новые стратегии синтеза полимеров, такие как включение протонных остатков в основную цепь полимера, и возродил исследования систем на основе поликатионов.[15]

Благодаря низкой токсичности, высокой нагрузочной способности и простоте изготовления поликатионные наноносители демонстрируют большие перспективы по сравнению со своими конкурентами, такими как вирусные векторы, которые демонстрируют высокую иммуногенность и потенциальную канцерогенность, и векторы на основе липидов, которые вызывают токсичность в зависимости от дозы. Полиэтиленимин[16] и хитозан являются одними из полимерных носителей, которые были тщательно изучены для разработки терапевтических средств для доставки генов. Другие поликатионные носители, такие как сложные поли (бета-аминоэфиры)[17] и полифосфорамидат[18] добавляются в библиотеку потенциальных носителей генов. В дополнение к разнообразию полимеров и сополимеров, простота управления размером, формой, химией поверхности этих полимерных наноносителей дает им преимущество в способности нацеливания и использования преимуществ повышенной проницаемости и удерживающего эффекта.[19]

Дендримеры

А дендример очень разветвленный макромолекула со сферической формой. Поверхность частицы может быть функционализирована многими способами, и многие свойства полученной конструкции определяются ее поверхностью.

В частности, можно построить катионный дендример, то есть дендример с положительным поверхностным зарядом. В присутствии генетического материала, такого как ДНК или РНК, зарядовая комплементарность приводит к временной ассоциации нуклеиновой кислоты с катионным дендримером. Достигнув своего места назначения, комплекс дендример-нуклеиновая кислота затем попадает в клетку посредством эндоцитоза.

В последние годы эталоном для агентов трансфекции являются катионные липиды. Сообщалось, что к ограничениям этих конкурирующих реагентов относятся: отсутствие способности трансфицировать некоторые типы клеток, отсутствие надежных возможностей активного нацеливания, несовместимость с моделями на животных и токсичность. Дендримеры предлагают прочную ковалентную конструкцию и полный контроль над структурой молекулы и, следовательно, размером. Вместе это дает убедительные преимущества по сравнению с существующими подходами.

Получение дендримеров исторически было медленным и дорогим процессом, состоящим из множества медленных реакций, что серьезно ограничивало их коммерческое развитие. Компания Dendritic Nanotechnologies из Мичигана открыла метод производства дендримеров с использованием кинетической химии, процесса, который не только снизил стоимость в три раза, но и сократил время реакции с месяца до нескольких дней. Эти новые дендримеры «Priostar» могут быть специально сконструированы так, чтобы нести полезную нагрузку ДНК или РНК, которая трансфицирует клетки с высокой эффективностью с небольшой токсичностью или без нее.[нужна цитата]

Неорганические наночастицы

Неорганические наночастицы, такие как золото, кремнезем, оксид железа (напр. магнитофекция) и фосфаты кальция была показана способность к доставке генов.[20] Некоторые из преимуществ неорганических векторов заключаются в их стабильности при хранении, низкой стоимости производства и, зачастую, времени, низкой иммуногенности и устойчивости к микробной атаке. Было показано, что наноразмерные материалы менее 100 нм эффективно улавливают ДНК или РНК и позволяет ему сбежать из эндосома без деградации. Также было показано, что неорганические вещества улучшают свойства in vitro. трансфекция для прикрепленных клеточных линий из-за их повышенной плотности и предпочтительного расположения на дне культуральной чашки. Квантовые точки также успешно использовались и позволяют сочетать генную терапию со стабильным маркером флуоресценции. Также в стадии разработки находятся искусственно созданные органические наночастицы, которые можно использовать для совместной доставки генов и терапевтических агентов.[21]

Проникающие в клетки пептиды

Проникающие в клетки пептиды (CPP), также известные как домены пептидной трансдукции (PTD), короткие пептиды (<40 аминокислот), которые эффективно проходят через клеточные мембраны, будучи ковалентно или нековалентно связанными с различными молекулами, что облегчает проникновение этих молекул в клетки. Вход в ячейку происходит в основном эндоцитоз но существуют и другие механизмы входа. Примеры грузовых молекул CPP включают: нуклеиновые кислоты, липосомы, и препараты с низким молекулярным весом.[22][23]

CPP-груз может быть направлен в специфические клеточные органеллы путем включения последовательности локализации в последовательности CPP. Например, последовательности ядерной локализации обычно используются для направления груза CPP в ядро.[24] Для направления в митохондрии митохондриальная нацеленная последовательность может быть использован; этот метод используется в защита (техника, позволяющая иностранным митохондриальная ДНК для вставки в митохондрии клеток).[25][26]

Гибридные методы

Благодаря каждому методу передача гена Имея недостатки, было разработано несколько гибридных методов, сочетающих в себе две или более техники. Виросомы являются одним из примеров; они сочетаются липосомы с инактивированным ВИЧ или вирус гриппа. Было показано, что это обеспечивает более эффективный перенос генов в респираторном эпителиальные клетки чем только вирусные или липосомные методы. Другие методы включают смешивание других вирусных векторов с катионные липиды или гибридизация вирусов.[27]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Дурай С., Мани М., Кандавелу К., Ву Дж., Портеус М. Х., Чандрасегаран С. (2005). «Нуклеазы цинковых пальцев: специально разработанные молекулярные ножницы для геномной инженерии клеток растений и млекопитающих». Исследования нуклеиновых кислот. 33 (18): 5978–90. Дои:10.1093 / нар / gki912. ЧВК 1270952. PMID 16251401.
  2. ^ Хасейн-Бей-Абина, С. (июль 2010 г.). «Эффективность генной терапии Х-сцепленного тяжелого комбинированного иммунодефицита». Медицинский журнал Новой Англии. 363 (4): 355–364. Дои:10.1056 / NEJMoa1000164. ЧВК 2957288. PMID 20660403 - через Pub Med.
  3. ^ «О SCID - отсутствующих системах защиты тела». Участок тяжелого иммунодефицита.
  4. ^ а б «Процесс генной терапии». Альтернативное лечение. 8 мая 2006 г. Альтернативная медицина, Интернет. 23 ноября 2009 г.[ненадежный медицинский источник?]
  5. ^ Харвуд AJ (1994). Протоколы для анализа генов. 1-й. 31 год. 31. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. Дои:10.1385/0896032582. ISBN 978-0-89603-258-3.
  6. ^ Мураками Т., Сунада Ю. (декабрь 2011 г.). «Генная терапия плазмидной ДНК с помощью электропорации: принципы и последние достижения». Современная генная терапия. 11 (6): 447–56. Дои:10.2174/156652311798192860. PMID 22023474.
  7. ^ https://www.scribd.com/doc/16368929/Genes-and-DNA-A-Beginners-Guide-to-Genetics-and-Its-Applications[требуется полная цитата]
  8. ^ Бонамасса Б., Хай Л., Лю Д. (апрель 2011 г.). «Гидродинамическая доставка генов и ее применение в фармацевтических исследованиях». Фармацевтические исследования. 28 (4): 694–701. Дои:10.1007 / s11095-010-0338-9. ЧВК 3064722. PMID 21191634.
  9. ^ Суда Т., Лю Д. (декабрь 2007 г.). «Гидродинамическая доставка генов: ее принципы и приложения». Молекулярная терапия. 15 (12): 2063–9. Дои:10.1038 / sj.mt.6300314. PMID 17912237.
  10. ^ Аль-Досари М.С., Кнапп Дж. Э., Лю Д. (2005). «Гидродинамическая доставка». Невирусные векторы для генной терапии. Успехи в генетике. 54 (Издание второе: Часть 2 изд.). С. 65–82. Дои:10.1016 / S0065-2660 (05) 54004-5. ISBN 978-0-12-017654-0. PMID 16096008.
  11. ^ Кришнамурти Б., Каранам В., Челлан В.Р., Сирам К., Натараджан Т.С., Грегори М. (июль 2014 г.). «Полимерсомы как эффективная система доставки лекарств от глиомы - обзор». Журнал нацеливания на лекарства. 22 (6): 469–77. Дои:10.3109 / 1061186X.2014.916712. PMID 24830300.
  12. ^ Чандравати Р., Карузо Ф. (октябрь 2012 г.). «Биомиметические мультикомпартментные сборки на основе липосом и полимерсом». Langmuir. 28 (39): 13798–807. Дои:10.1021 / la301958v. PMID 22831559.
  13. ^ Инь Х, Канасты Р.Л., Эльтоухи А.А., Вегас А.Дж., Доркин Дж.Р., Андерсон Д.Г. (август 2014 г.). «Невирусные векторы для генной терапии». Обзоры природы. Генетика. 15 (8): 541–55. Дои:10.1038 / nrg3763. PMID 25022906.
  14. ^ Акинц А., Томас М., Клибанов А.М., Лангер Р. (май 2005 г.). «Изучение полиэтиленимин-опосредованной трансфекции ДНК и гипотезы протонной губки». Журнал генной медицины. 7 (5): 657–63. Дои:10.1002 / jgm.696. PMID 15543529.
  15. ^ Тиера MJ, Ши Q, Winnik FM, Фернандес JC (август 2011). «Генная терапия на основе поликатиона: текущие знания и новые перспективы». Современная генная терапия. 11 (4): 288–306. Дои:10.2174/156652311796150408. PMID 21453278.
  16. ^ Нимеш С (май 2012 г.). «Полиэтиленимин как многообещающий вектор для направленной доставки миРНК». Современная клиническая фармакология. 7 (2): 121–30. Дои:10.2174/157488412800228857. PMID 22432843.
  17. ^ Козельский К.Л., Ценг С.Ю., Грин Дж. Дж. (Июнь 2013 г.). «Биовосстановленный линейный поли (β-аминоэфир) для доставки миРНК». Химические коммуникации. 49 (46): 5319–21. Дои:10,1039 / c3cc40718g. ЧВК 3894248. PMID 23646347.
  18. ^ Цзян X, Цюй В., Пан Д., Рен Й, Уиллифорд Дж. М., Цуй Х., Луиджтен Э., штаб-квартира Мао (январь 2013 г.). «Плазмидный контроль формы наночастиц конденсированного блок-сополимера ДНК». Современные материалы. 25 (2): 227–32. Дои:10.1002 / adma.201202932. ЧВК 3918481. PMID 23055399.
  19. ^ Мацумура Й., Маэда Х. (декабрь 1986 г.). «Новая концепция макромолекулярной терапии в химиотерапии рака: механизм туморитропного накопления белков и противоопухолевые средства». Исследования рака. 46 (12, Pt 1): 6387–92. PMID 2946403.
  20. ^ Вагнер Д.Е., Бхадури С.Б. (февраль 2012 г.). «Прогресс и перспективы использования неорганических наночастиц для доставки последовательностей нуклеиновых кислот, связанных с ортопедическими патологиями: обзор». Тканевая инженерия, часть B: обзоры. 18 (1): 1–14. Дои:10.1089 / ten.TEB.2011.0081. PMID 21707439.
  21. ^ Сингх Б.Н., Гупта В.К., Чен Дж., Атанасов А.Г. (декабрь 2017 г.). «Комбинаторные подходы на основе органических наночастиц для генной терапии». Тенденции в биотехнологии. 35 (12): 1121–1124. Дои:10.1016 / j.tibtech.2017.07.010. PMID 28818304.
  22. ^ Кополовичи Д.М., Лангель К., Эристе Э., Лангель Ü (март 2014 г.). «Проникающие в клетки пептиды: дизайн, синтез и применение». САУ Нано. 8 (3): 1972–94. Дои:10.1021 / nn4057269. PMID 24559246.
  23. ^ Palm-Apergi C, Lönn P, Dowdy SF (апрель 2012 г.). «Действительно ли проникающие в клетки пептиды« проникают »через клеточные мембраны?». Молекулярная терапия. 20 (4): 695–7. Дои:10,1038 / мт.2012,40. ЧВК 3322330. PMID 22472979.
  24. ^ Reissmann S (октябрь 2014 г.). «Проникновение в клетки: объем и ограничения применения пептидов, проникающих в клетки». Журнал пептидной науки. 20 (10): 760–84. Дои:10.1002 / psc.2672. PMID 25112216.
  25. ^ Милешина Д., Ибрагим Н., Бош П., Lightowlers RN, Дитрих А., Вебер-Лотфи Ф. (август 2011 г.). «Митохондриальная трансфекция для изучения репарации органеллярной ДНК, поддержания генома и старения». Механизмы старения и развития. 132 (8–9): 412–23. Дои:10.1016 / j.mad.2011.05.002. PMID 21645537.
  26. ^ Юн Ю.Г., Куб доктор медицины, Ю Ю.Х. (июнь 2010 г.). «Реинжиниринг митохондриальных геномов в клетках млекопитающих». Анатомия и клеточная биология. 43 (2): 97–109. Дои:10.5115 / acb.2010.43.2.97. ЧВК 2998782. PMID 21189990.
  27. ^ Сян; и другие. (2017). «Эффективный терапевтический перенос генов с помощью инактивированных ретровирусных векторов: краткое изложение подходов и обзор текущей литературы». Журнал терапевтических биомолекулярных исследований. 18 (14): 288–311.