WikiDer > Инактивация вирусов

Virus inactivation

Вирусная инактивация остановить вирусы в данном образце от заражения желаемого продукта либо путем полного удаления вирусов, либо за счет того, что они не заразны. Эти методы широко используются в приготовлении пищи и плазма крови[1] промышленности, так как эти продукты могут пострадать из-за присутствия вирусных частиц. Некоторые из наиболее распространенных вирусов, удаляемых этими методами: ВИЧ-1 и ВИЧ-2 вирусы; гепатит А, В и С; и парвовирусы.[2] Эти методы были адаптированы для удаления прионы, не относящиеся к вирусам, из продуктов крови.[3]

Удаление

Этот всеобъемлющий процесс, который стал известен просто как удаление вирусов, представляет собой процесс, при котором все вирусы в данном образце удаляются традиционными методами экстракции или [полной энергии]. Некоторые из наиболее известных методов включают:

Эти процессы экстракции считаются «традиционными», потому что они никоим образом не влияют на химический состав вируса; они просто физически удаляют его из образца.

Нанофильтрация

Процессы удаления вирусов с использованием методов нанофильтрации[4] удалять вирусы, исключая размер. Этот тип процесса обычно используется для парвовирусов.[5] и другие вирусы, содержащие белковая оболочка. Типичный вирион ВИЧ составляет 180 нм, а типичный парвовирус может варьироваться от 15 до 24 нм, что очень мало. Одно большое преимущество фильтрации по сравнению с методами, предполагающими экстремальные температуры или кислотность, заключается в том, что фильтрация не денатурировать белки в образце. Нанофильтрация также эффективна для большинства типов белков. Поскольку он не является химически селективным, независимо от химического состава поверхности вирусной частицы, процессы удаления вирусов с использованием методов нанофильтрации по-прежнему будут эффективны. Еще одним большим преимуществом этого метода является его способность выполнять в лабораторных условиях, а затем эффективно масштабировать до производственных стандартов. Однако важно учитывать тот факт, что степень удаления вирусов зависит от размера пор нанофильтра. В некоторых случаях очень маленькие вирусы не будут отфильтрованы. Также необходимо учитывать возможные эффекты изменения давления и расхода.

Некоторые из фильтров, используемых для выполнения этих типов процессов: Planova 15N,[6] Планова 20Н, BioEX, VAG - 300, Viresolve 180,[7] Viresolve 70TM и Virosart[8] классифицировать.

Хроматография

Хроматографические методы удаления вирусов отлично подходят для очистки белка, а также эффективны против всех типов вирусов, но уровень удаления вирусов зависит от состава колонки и используемых в процессе реагентов. Также стоит отметить, что эффективность этого процесса может сильно различаться между вирусами и что эффективность процесса может меняться в зависимости от используемого буфера. При выполнении этой процедуры также необходимо соблюдать санитарные условия между партиями.

Инактивация

Инактивация вирусов делает вирусы неспособными инфицировать. Многие вирусы содержат липид или же белок покрытия, которые могут быть инактивированы химическим воздействием. Вирусная инактивация отличается от удаления вируса, потому что в первом процессе химический состав поверхности вируса изменяется, и во многих случаях (теперь неинфекционные) вирусные частицы остаются в конечном продукте. Вместо того, чтобы просто сделать вирус неактивным, некоторые процессы инактивации вируса фактически денатурировать вирус полностью. Вирусная инактивация широко используется в плазма крови промышленность.

Чтобы добиться инактивации вирусов в образце, необходимо выполнить «специальные» процессы очистки, которые каким-либо образом химически изменят вирус. Вот некоторые из наиболее широко используемых процессов:

  • Инактивация растворителей / моющих средств
  • Пастеризация (обогрев)
  • Кислая инактивация pH

В некоторых случаях инактивация вирусов не является жизнеспособной альтернативой удаления, поскольку даже денатурированные или инактивированные иным образом вирусные частицы могут оказывать вредное воздействие на технологический поток или сам продукт.

Инактивация растворителем / детергентом (S / D)

Этот процесс, разработанный Нью-Йоркский центр крови,[9] на сегодняшний день является наиболее широко используемым методом инактивации вирусов. Он преимущественно используется в производстве плазмы крови более чем 50 организациями по всему миру и Американский Красный Крест [1]. Этот процесс эффективен только для вирусов, заключенных в липид пальто, однако. Детергенты, используемые в этом методе, прерывают взаимодействия между молекулами липидного покрытия вируса. Большинство вирусов в оболочке не могут существовать без липидной оболочки, поэтому они разрушаются при воздействии этих детергентов. Другие вирусы нельзя уничтожить, но они не могут воспроизводиться, что делает их неинфекционными. Растворитель создает среду, в которой реакция агрегации между липидным покрытием и детергентом происходит быстрее. Обычно используется моющее средство Тритон Х-100.

Химическая структура Тритона Х-100 (n = 9-10).

Этот процесс имеет много преимуществ перед "традиционными" методами удаления. Этот процесс не денатурирует белки, потому что детергенты влияют только на липиды и производные липидов. Благодаря этому процессу достигается 100% вирусная гибель, а оборудование относительно простое и удобное в использовании. Оборудование, предназначенное для очистки поствирусно-инактивированного материала, необходимо для защиты от загрязнения последующих технологических потоков.

В S / D-обработке используются легко доступные и относительно недорогие реагенты, но эти реагенты должны быть удалены из продукта перед распределением, что потребует дополнительных стадий процесса. Поскольку этот процесс удаляет / инактивирует липидную оболочку вируса, вирусы без какой-либо липидной оболочки не пострадают. Также отсутствует эффект инактивации буферы используется в этом процессе.

Пастеризация

Инактивация вирусов с помощью пастеризация может быть очень эффективным, если белки, которые вы пытаетесь защитить, более термостойкие, чем вирусные примеси, с которыми они находятся в растворе. Некоторые из наиболее заметных преимуществ процессов такого типа заключаются в том, что они требуют простого оборудования и эффективны как для окруженных и вирусы без оболочки. Поскольку пастеризация включает повышение температуры раствора до значения, которое достаточно денатурирует вирус, не имеет значения, есть ли у вируса оболочка или нет, поскольку оболочка сама по себе не может защитить вирус от таких высоких температур. Однако есть некоторые белки, которые, как было установлено, действуют как термостабилизаторы для вирусов. Конечно, если целевой белок не является термостойким, использование этого метода может денатурировать этот целевой белок, а также вирусную примесь. Обычно инкубация длится 10 часов и проводится при 60 °.C.

Кислая инактивация pH

Некоторые вирусы при низком pH, денатурирует самопроизвольно. Подобно пастеризации, этот метод инактивации вирусов полезен, если целевой белок более устойчив к низким pH, чем вирусная примесь. Этот метод эффективен против вирусов в оболочке, а обычно используемое оборудование простое и удобное в эксплуатации. Однако этот метод инактивации не так эффективен для вирусов без оболочки, а также требует повышенных температур. Таким образом, чтобы использовать этот метод, целевой белок должен быть устойчивым к низким значениям pH и высоким температурам, что, к сожалению, не относится ко многим биологическим белкам. Инкубация для этого процесса обычно происходит при pH 4 и длится от 6 часов до 21 дня.

Инактивация ультрафиолетом (УФ)

УФ-лучи могут повредить ДНК живых организмов, создавая димеры нуклеиновых кислот. Однако повреждения обычно не важны из-за низкого проникновения УФ-излучения через живые ткани. Однако ультрафиолетовые лучи могут использоваться для инактивации вирусов, поскольку частицы вируса малы и ультрафиолетовые лучи могут достигать генетического материала, вызывая димеризацию нуклеиновых кислот. После димеризации ДНК частицы вируса не могут реплицировать свой генетический материал, который препятствует их распространению.

Ультрафиолетовый свет в сочетании с рибофлавином показал свою эффективность в снижении количества патогенов в продуктах переливания крови.[10][11] Рибофлавин и УФ-свет повреждает нуклеиновые кислоты в вирусах, бактериях, паразитах и ​​лейкоцитах доноров, делая их неспособными к репликации и вызывая болезнь.[12][13][14]

Исследования пиков

Во многих случаях концентрация вирусов в данном образце чрезвычайно низка. В других процессах экстракции низкие уровни примесей могут быть незначительными, но поскольку вирусы заразный примесей, даже одной вирусной частицы может быть достаточно, чтобы разрушить всю технологическую цепочку. Именно по этой причине необходимо принять специальные меры для определения подходящего метода удаления или инактивации для любого типа вируса, извлекаемого из любого типа раствора.

Исследования пиков были созданы специально для этого. Пиковое исследование - это исследование, проводимое с целью определения возможных методов удаления или инактивации вирусов. Результаты этих исследований являются числовыми, и на их основе исследователи могут определить, подходит ли процесс, на котором было проведено исследование, для вирусов, которые они пытаются извлечь, и решения, из которого они пытаются их извлечь. .

Метод

Экспериментально было показано, что увеличение количества вирусов (или уровня активности) в образце в 10 раз4 или 105 оригинала изменит соотношение удаления / инактивации вирусов только на один порядок [ссылка?]. На основе этих знаний были созданы исследования пиков, в которых количество вирусов (или уровень активации) увеличивалось или «повышалось» в 10 раз.4 или 105 оригинального образца. Это новое большое число или уровень активности затем пропускается через поток процесса и очищается. Число или уровень активности берется в начале и в конце технологического потока и используется при вычислении коэффициента снижения.

Коэффициент уменьшения

Коэффициент снижения (RF) для этапа удаления или инактивации вируса рассчитывается с использованием следующего уравнения:[15]

РФшаг = журнал10 [(V1 x T1) / (V2 x T2)]

Где: V1 = объем исходного сырья до стадии очистки; T1 = концентрация вируса в добавленном сырье перед этапом очистки; V2 = объем материала после шага очистки; и T2 = концентрация вируса в материале после этапа очистки.

Коэффициент уменьшения, необходимый для определенного технологического потока, зависит от множества различных факторов, некоторые из которых включают:

  • Ожидаемая начальная концентрация вируса
  • Очищаемый продукт
  • Инфекционная доза вируса (для in vivo использование)
  • Является ли инактивация реальной альтернативой полному удалению
  • Возможности лаборатории
  • Относительная сложность метода инактивации или удаления

Приложения

Эта технология широко используется в пищевой и фармацевтической промышленности, но некоторые другие области применения вирусной обработки:

  • Очистка воздуха (Millipore) [16]
  • Вакцина
  • Извлечение вирусного образца
  • Очистка воды
  • Инактивация вируса Западного Нила

Рекомендации

  1. ^ Шандер А., Лобель Г.П., Джавидрузи М. (июнь 2016 г.). «Практика переливания и инфекционные риски». Экспертный обзор гематологии. 9 (6): 597–605. Дои:10.1586/17474086.2016.1164593. PMID 26959944.
  2. ^ Ди Минно Дж., Перно К. Ф., Тиеде А, Наварро Д., Канаро М., Гюртлер Л., Айронсайд Дж. В. (январь 2016 г.). «Современные концепции предотвращения передачи патогенов через продукты, полученные из крови / плазмы, при нарушениях свертываемости крови». Отзывы о крови. 30 (1): 35–48. Дои:10.1016 / j.blre.2015.07.004. ЧВК 7115716. PMID 26381318.
  3. ^ Тернер М.Л. (2018). «Безопасность крови, производных крови и продуктов из плазмы». Справочник по клинической неврологии. 153: 463–472. Дои:10.1016 / B978-0-444-63945-5.00026-X. PMID 29887153.
  4. ^ «Нанофильтрация». Eurodia.com. Получено 2010-11-23.
  5. ^ «Большая книга вирусов - парвовирусов». Virology.net. Получено 2010-11-23.
  6. ^ «Планова: Дом». Asahi-kasei.co.jp. 2010-07-29. Получено 2010-11-23.
  7. ^ "Модуль технологической области Viresolve". Millipore. Получено 2010-11-23.
  8. ^ "Микросайты Sartorius AG: Виросарт". microsite.sartorius.com. Получено 2016-05-24.
  9. ^ «Нью-Йоркский центр крови». Nybloodcenter.org. Получено 2010-11-23.
  10. ^ Ruane PH и др., «Фотохимическая инактивация выбранных вирусов и бактерий в концентратах тромбоцитов с использованием рибофлавина и света». Transfusion 2004; 44: 877-885.
  11. ^ де Кок и др., "Программа оценки Mirasol: Использование Mirasol PRT для тромбоцитов в повседневной клинической практике>" Переливание крови 2008: 48 (Дополнение): 156A
  12. ^ Гудрич Р.П. и др., Глава 5: «Противовирусные и антибактериальные свойства рибофлавина и света: применение в безопасности крови и трансфузионной медицине». Флавины: фотохимия и фотобиология, Vol. 6 октября 2006 г., Королевское химическое общество; Кембридж, Соединенное Королевство. Э. Сильва и А. М. Эдвардс, редакторы.
  13. ^ Кумар В. и др., «Снижение количества патогенов на основе рибофлавина и УФ-света: степень и последствия повреждения ДНК на молекулярном уровне». Фотохимия и фотобиология 2004; 80: 15-21.
  14. ^ Гудрич Р.П. и др., «Определение« адекватной »эффективности снижения патогенов для компонентов перелитой крови». Принята к публикации Transfusion 2010
  15. ^ Примечание к руководству по исследованиям валидации вирусов: дизайн, вклад и интерпретация исследований, подтверждающих инактивацию и удаление вирусов, EMEA CPMP BWP, 268/95 1996
  16. ^ «Оптимизация производительности вирусного фильтра с помощью предварительной фильтрации». Millipore. Получено 2010-11-23.