WikiDer > Анализ ДА и ЯС - Википедия

YES and YAS assay - Wikipedia

ДА и анализ YAS YВосток Eстроген Screen = ДА, YВосток Андроген Screen = YAS

Эти in vitro были разработаны экраны для обнаружения эстрогенный (ДА) и андрогенный (ЯС) деятельность природных и синтетических соединений, смесей и проб окружающей среды.

Тест основан на генетически модифицированных дрожжевые клетки (Saccharomyces cerevisiae), которые содержат ген человеческого рецептора эстрогена или андрогена, связанный с репортерным геном (например, lacZ). Активация рецептора запускает каскад событий, ведущих к экспрессии продукта репортерного гена (например, β-галактозидаза), который преобразует субстрат (например, CPRG), что приводит к измеряемому изменению цвета с желтого на красный в среде.[1][2] Альтернативные системы основаны на генерации сигнала люминесценции.[3] Активирующие (агонистические) образцы можно измерить напрямую; ингибирующая (антагонистическая) активность измеряется как уменьшение развития окраски в присутствии известного активирующего вещества.

Формат анализа

Анализ YES / YAS проводят в 96-луночных микротитровальных планшетах. Общее время анализа обычно составляет 2–3 дня, но были разработаны более быстрые протоколы (время воздействия 18 часов) с использованием индуцированного лизиса клеток.[4]Было разработано несколько линий дрожжевых клеток для анализа YES и YAS, как патентованных, так и общедоступных. Также доступны коммерческие наборы со всеми необходимыми ингредиентами и подробными инструкциями.[5]

Актуальность

Вещества с активирующим или ингибирующим действием на рецепторы эстрогенов и / или андрогенов организмов могут мешать репродукции, влиять на метаболизм и иммунную систему и вызывать образование опухолей.[6]Этот анализ подходит для обнаружения множества природных и синтетических гормонально активных веществ, таких как токсины окружающей среды, в повседневных продуктах, например противозачаточная таблетка ингредиенты (17α-этинилэстрадиол), синтетические материалы (бисфенол А, фталаты), пестициды (метоксихлор) и неионных поверхностно-активных веществ (алкилфенолы). Тест имеет хорошую воспроизводимость и соответствует литературным данным in vivo или же in vitro данные [7]

Преимущества

Анализ имеет очень хорошую чувствительность (предел обнаружения 17β-эстрадиола в анализе YES около 5 x 10−12 М или 1,4 нг / л),[1][2][4] а формат микропланшетов требует лишь небольшого количества образца. Возможен анализ нативных водных образцов, концентрированных образцов окружающей среды и химикатов или смесей в растворителях, таких как этанол или ДМСО. Результаты могут быть получены так же быстро, как после воздействия в течение ночи.[4]Обращение с дрожжевыми клетками обычно менее требовательно, чем с культурой клеток млекопитающих.

Руководства и литература

На сегодняшний день международные стандарты отсутствуют. An ISO Руководство по тесту YES находится в стадии подготовки.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б Рутледж, Э.Дж. и Самптер, Дж. П. (1996). Environ. Toxicol. Chem. 15 (3): 241-248.
  2. ^ а б Сохони П. и Самптер Дж. П. (1998). Эндокринол. 158, 327-339
  3. ^ Первис, И. Дж., Чотаи, Д., Дайкс, К. В., Любан, Д. Б., Френч, Ф. С., Уилсон, Э. М., и Хобден, А. Н. (1991). Ген 106,35–42.
  4. ^ а б c Schultis T. и Metzger J.W., 2004. Chemosphere 57, 1649-1655.
  5. ^ Xenometrix AG, Альшвиль, Швейцария.
  6. ^ Публикация NIH №: 03-4503: Отчет об оценке метода испытаний: Обзор тестов для скрининга эндокринных разрушителей in vitro (2003 г.):https://ntp.niehs.nih.gov/iccvam/docs/endo_docs/edfinalrpt0503/edfinrpt.pdf
  7. ^ Колле С.Н., Камп Х.Г., Хуэнер Х.А., Никель Дж., Верлохнер А., Войтковяк К., Ландзидель Р., ван Равенцвай Б. (2010). Toxicol. In vitro 24 (7): 2030-2040 гг.