WikiDer > Архаеллум

Archaellum

An архаеллум (множественное число: архаэлла, ранее жгутик архей) представляет собой уникальную плетевидную структуру на клеточной поверхности многих археи. Название было предложено в 2012 году после исследований, которые показали, что оно эволюционно и структурно отличается от бактериального и эукариотического. жгутики. Архаеллум функционально тот же - он может вращаться и используется для плавания в жидких средах. Архаеллум структурно сходен с пилус IV типа.[1][2]

История

В 1977 г. археи были впервые выделены в отдельную группу прокариот в трехдоменная система из Карл Вёзе и Джордж Э. Фокс, исходя из различий в последовательности рибосомальной РНК (16S рРНК) гены.[3][4] Этот домен обладает множеством фундаментальных признаков, отличных как от бактериального, так и от эукариотического доменов. Многие археи обладают вращающейся структурой подвижности, которая поначалу казалась похожей на бактериальную и эукариотическую. жгутики. В жгутик (По-латыни хлыст) представляет собой плетчатый придаток, который выступает из клетки. В последние два десятилетия было обнаружено, что жгутики архей, хотя функционально сходны с жгутиками бактерий и эукариот, по структуре напоминают жгутики бактерий IV типа. пили.[5][6][7] Бактериальный тип IV пили это поверхностные конструкции, которые можно расширять и убирать, чтобы подергивание моторики и используются для прилипания к твердым поверхностям или перемещения по ним; их «хвостовые» белки называются пилинами.[8][9] Чтобы подчеркнуть эти различия, Кен Джаррелл и Соня-Верена Альберс предложили изменить название жгутика архей на archaellum.[10]

Структура

Электронные микрофотографии Sulfolobus acidocaldarius MW001 при нормальном росте. Обозначение архаеллы (черные стрелки) и пилей (белые стрелки). Отрицательное окрашивание уранилацетатом.

Составные части

Модель кренархейной архаеллы 2015 г.[1]

Большинство белков, составляющих архаеллу, кодируются в одном генетическом локусе. Этот генетический локус содержит 7-13 генов, которые кодируют белки, участвующие либо в сборке, либо в функции архаеллы.[7] Генетический локус содержит гены, кодирующие архаеллины (flaA и flaB)[а] - структурные компоненты нити - и компоненты двигателя (flaI, flaJ, flaH). Кроме того, локус кодирует другие дополнительные белки (флаг, хлопать, FlaC, пламя, flaE, и flaX). FlaX встречается только у Crenarchaeota и FlaCDE (которые могут существовать как отдельные белки или как гибридные белки) у Euryarchaeotes. Считается, что FlaX и FlaCDE обладают схожими функциями, и считается, что неизвестный белок выполняет ту же функцию у Thaumarchaeota.

Оперон архаеллы исторически известен как fla (от «жгутика»), но во избежание путаницы с бактериальным жгутиком и для согласования с остальной номенклатурой (архаеллы, архаеллины) его недавно было предложено переименовать в arl (арчаелlin-родственные гены).[11] Следовательно, и названия генов различаются (например, flaJ сейчас arlJ). Поэтому в специальной литературе можно встретить обе номенклатуры с обозначением arl номенклатура все чаще используется с 2018 года.

Генетический анализ различных архей показал, что каждый из этих компонентов важен для сборки архаеллы.[12][13][14][15][16] В то время как большинство генов, ассоциированных с fla, обычно обнаруживаются в Euryarchaeota, один или несколько из этих генов отсутствуют во fla-опероне в Crenarchaeota. В препилинпептидаза (называемый PibD у crenarchaeota и FlaK у euryarchaeota) необходим для созревания архаеллинов и обычно кодируется где-нибудь в другом месте хромосомы.[17]

Функциональная характеристика была проведена для ArlI, члена суперсемейства АТФаз системы секреции типа II / IV.[18] и PibD / FlaK.[17][19][20] FlaI образует гексамер, который гидролизует АТФ и, скорее всего, генерирует энергию для сборки архаеллы и для ее вращения. PibD расщепляет N-конец архаеллинов, прежде чем они могут быть собраны. ArlH (PDB: 2DR3) Имеет RecA-подобные складчатые и неактивные домены АТФазы. ArlH и ArlJ - два других основных компонента, которые вместе с ArlI образуют основную платформу / двигатель. В Crenarchaeota ArlX действует как лесовоз вокруг двигателя.[21] ArlF и ArlG потенциально являются частью статора мотора архаеллы; ArlF связывает S-слой, а ArlG образует филаменты, которые, по-видимому, «закрыты» ArlF. Следовательно, эти два белка потенциально действуют вместе, прикрепляя моторный комплекс к S-слою и обеспечивая жесткую структуру, относительно которой вращающиеся компоненты мотора - вероятно, ArlJ - могут вращаться.[22][23]

Гены, кодирующие arlC, arlD, и arlE присутствуют только у Euryarchaeota и взаимодействуют с белками хемотаксиса (например, CheY, CheD и CheC2, а также с специфичным для архей CheF) для восприятия сигналов окружающей среды (таких как воздействие света определенной длины волны, условия питания и т. д.).[24][25]

Строение и сборка: пилус IV типа (T4P) и архаеллум

В 1980-х годах лаборатория Дитера Эстерхельта впервые показала, что галоархеи переключают вращение их архаеллы с часовой стрелки на против часовой стрелки при импульсах синего света.[26][27] Это привело микробиологов к мысли, что структура подвижности архей не только функционально, но и структурно напоминает жгутики бактерий. Тем не менее, начали накапливаться доказательства, указывающие на то, что архаеллы и жгутики разделяют свои функции, но не структуру и историю эволюции. Например, в отличие от флагеллины, архаеллины (белковые мономеры, которые образуют филамент архаеллы) продуцируются как препротеины, которые перед сборкой обрабатываются специфической пептидазой. Их сигнальный пептид гомологичен сигнальным пептидам класса III препилинов IV типа, которые процессируются в грамотрицательных бактериях пептидазой PilD.[28] У Crenarchaeota PibD и у euryarchaeota FlaK являются гомологами PilD, которые необходимы для созревания архаеллинов. Кроме того, архаеллины N-гликозилированы.[29][30] который не был описан для бактериальных флагеллинов, где очевидно О-связанное гликозилирование.

Еще одно существенное различие между архаеллумом и жгутиком - это диаметр их нитей. В то время как бактериальный жгутик полый, что позволяет мономерам флагеллина проходить через его внутреннюю часть к кончику растущей нити, нить архаеллы тоньше, что препятствует прохождению мономеров архаеллина.[31][32][33][34][35] Это свидетельство указывает на то, что механизм сборки архаеллы больше похож на механизм сборки, наблюдаемый в пилях типа IV (в которых мономеры собираются на дне растущего филамента), чем на механизм сборки жгутиков через систему секреции типа III.[36][37]

Сходство между архаеллами и T4P стало более очевидным с идентификацией двух белков моторных комплексов архаелл, которые имеют гомологи в системах секреции T4P и типов IV и II. В частности, ArlJ и ArlI гомологичны PilC и PilB / PilT соответственно. ArlJ - это мембранные белки, о которых мало что известно о структуре и функциях, а ArlI - единственная АТФаза, обнаруженная в опероне архаеллы, что позволяет предположить, что этот белок обеспечивает сборку и вращение филамента.[38][7][18]

Функциональные аналоги

Несмотря на ограниченное количество деталей, доступных в настоящее время относительно структуры и сборки архаеллы, из многочисленных исследований становится все более очевидным, что архаеллы играют важную роль во множестве клеточных процессов у архей. Несмотря на структурные различия с бактериальным жгутиком, основная функция, приписываемая архаеллам, - это плавание в жидкости.[16][39][40] и полутвердые поверхности.[41][42] Растущий объем биохимической и биофизической информации еще больше укрепил ранние наблюдения за плаванием архей, опосредованным архаеллами. Как жгутик бактерии,[43][44] архаелла также обеспечивает прикрепление к поверхности и межклеточную коммуникацию.[45][46] Однако, в отличие от бактериального жгутика archaellum, не было показано, что он играет роль в образовании биопленок архей.[47] В архейных биопленках единственная предполагаемая функция до сих пор заключается в фазе распространения биопленки, когда архейные клетки покидают сообщество, используя свою архаеллу, чтобы далее инициировать следующий раунд образования биопленки. Кроме того, было обнаружено, что архаелла может иметь сайт связывания с металлом.[31]

Рекомендации

  1. ^ У некоторых видов названия даны как FlgA и FlgB.
  1. ^ а б Альберс С.В., Джаррелл К.Ф. (27 января 2015 г.). "Архаеллум: как плавают археи". Границы микробиологии. 6: 23. Дои:10.3389 / fmicb.2015.00023. ЧВК 4307647. PMID 25699024.
  2. ^ Ван Ф., Цвиркайте-Крупович В., Крейцбергер М.А., Су З., де Оливейра Г.А., Осински Т. и др. (Август 2019 г.). «Экстенсивно гликозилированный пильс архей выживает в экстремальных условиях». Природная микробиология. 4 (8): 1401–1410. Дои:10.1038 / с41564-019-0458-х. ЧВК 6656605. PMID 31110358.
  3. ^ Woese CR, Fox GE (ноябрь 1977 г.). «Филогенетическая структура прокариотического домена: первичные царства». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 74 (11): 5088–90. Bibcode:1977PNAS ... 74.5088W. Дои:10.1073 / пнас.74.11.5088. ЧВК 432104. PMID 270744.
  4. ^ Woese CR, Kandler O, Wheelis ML (июнь 1990 г.). «На пути к естественной системе организмов: предложение по доменам архей, бактерий и эукариев». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 87 (12): 4576–9. Bibcode:1990PNAS ... 87,4576 Вт. Дои:10.1073 / pnas.87.12.4576. ЧВК 54159. PMID 2112744.
  5. ^ Пибоди ЧР, Чанг Й.Дж., Йен М.Р., Видал-Ингильярди Д., Пагсли А.П., Сайер М.Х. (ноябрь 2003 г.). «Секреция белка типа II и ее связь с бактериальными пилями IV типа и жгутиками архей». Микробиология. 149 (Pt 11): 3051–3072. Дои:10.1099 / мик.0.26364-0. PMID 14600218.
  6. ^ Pohlschroder M, Ghosh A, Tripepi M, Albers SV (июнь 2011 г.). «Пилосоподобные структуры архей IV типа - эволюционно законсервированные прокариотические поверхностные органеллы». Текущее мнение в микробиологии. 14 (3): 357–63. Дои:10.1016 / j.mib.2011.03.002. PMID 21482178.
  7. ^ а б c Гош А., Альберс С.В. (январь 2011 г.). «Сборка и функция жгутика архей». Сделки Биохимического Общества. 39 (1): 64–9. Дои:10.1042 / BST0390064. PMID 21265748.
  8. ^ Craig L, Pique ME, Tainer JA (май 2004 г.). «Строение ворсинок IV типа и патогенность бактерий». Обзоры природы. Микробиология. 2 (5): 363–78. Дои:10.1038 / nrmicro885. PMID 15100690. S2CID 10654430.
  9. ^ Крейг Л., Ли Дж. (Апрель 2008 г.). «Пили IV типа: парадоксы по форме и функциям». Текущее мнение в структурной биологии. 18 (2): 267–77. Дои:10.1016 / j.sbi.2007.12.009. ЧВК 2442734. PMID 18249533.
  10. ^ Джаррелл К.Ф., Альберс С.В. (июль 2012 г.). «Архаеллум: старая структура моторики с новым названием». Тенденции в микробиологии. 20 (7): 307–12. Дои:10.1016 / j.tim.2012.04.007. PMID 22613456.
  11. ^ Pohlschroder M, Pfeiffer F, Schulze S, Abdul Halim MF (сентябрь 2018 г.). «Биогенез поверхности клеток архей». Обзор микробиологии FEMS. 42 (5): 694–717. Дои:10.1093 / femsre / fuy027. ЧВК 6098224. PMID 29912330.
  12. ^ Patenge N, Berendes A, Engelhardt H, Schuster SC, Oesterhelt D (август 2001 г.). «Кластер генов fla участвует в биогенезе жгутиков Halobacterium salinarum». Молекулярная микробиология. 41 (3): 653–63. Дои:10.1046 / j.1365-2958.2001.02542.x. PMID 11532133.
  13. ^ Томас Н.А., Барди С.Л., Джаррелл К.Ф. (апрель 2001 г.). «Жгутик архей: другой вид структуры подвижности прокариот». Обзор микробиологии FEMS. 25 (2): 147–74. Дои:10.1111 / j.1574-6976.2001.tb00575.x. PMID 11250034.
  14. ^ Томас Н.А., Мюллер С., Кляйн А., Джаррелл К.Ф. (ноябрь 2002 г.). «Мутанты во flaI и flaJ археи Methanococcus voltae испытывают недостаток в сборке жгутика». Молекулярная микробиология. 46 (3): 879–87. Дои:10.1046 / j.1365-2958.2002.03220.x. PMID 12410843.
  15. ^ Чабан Б., Нг С.Ю., Канбе М., Зальцман И., Ниммо Г., Айзава С., Джаррелл К.Ф. (ноябрь 2007 г.). «Систематические делеционные анализы генов fla в опероне жгутиков выявляют несколько генов, необходимых для правильной сборки и функционирования жгутиков в архее, Methanococcus maripaludis». Молекулярная микробиология. 66 (3): 596–609. Дои:10.1111 / j.1365-2958.2007.05913.x. PMID 17887963.
  16. ^ а б Лассак К., Найнер Т., Гош А., Клингл А., Вирт Р., Альберс С.В. (январь 2012 г.). «Молекулярный анализ жгутика кренархей». Молекулярная микробиология. 83 (1): 110–24. Дои:10.1111 / j.1365-2958.2011.07916.x. PMID 22081969.
  17. ^ а б Барди С.Л., Джаррелл К.Ф. (ноябрь 2003 г.). «Расщепление префлагеллинов сигнальной пептидазой аспарагиновой кислоты необходимо для флагелляции у архей Methanococcus voltae». Молекулярная микробиология. 50 (4): 1339–47. Дои:10.1046 / j.1365-2958.2003.03758.x. PMID 14622420.
  18. ^ а б Гош А., Хартунг С., ван дер Доус С., Тайнер Дж. А., Альберс С. В. (июль 2011 г.). «Жгутиковый мотор АТФазы архей демонстрирует АТФ-зависимую гексамерную сборку и стимуляцию активности за счет специфического связывания липидов». Биохимический журнал. 437 (1): 43–52. Дои:10.1042 / BJ20110410. ЧВК 3213642. PMID 21506936.
  19. ^ Барди С.Л., Джаррелл К.Ф. (февраль 2002 г.). «FlaK археи Methanococcus maripaludis обладает префлагеллинпептидазной активностью». Письма о микробиологии FEMS. 208 (1): 53–9. Дои:10.1111 / j.1574-6968.2002.tb11060.x. PMID 11934494.
  20. ^ Szabó Z, Stahl AO, Albers SV, Kissinger JC, Driessen AJ, Pohlschröder M (февраль 2007 г.). «Идентификация различных архейных белков с помощью сигнальных пептидов класса III, расщепляемых отдельными препилинпептидазами архей». Журнал бактериологии. 189 (3): 772–8. Дои:10.1128 / JB.01547-06. ЧВК 1797317. PMID 17114255.
  21. ^ Альберс С.В., Джаррелл К.Ф. (апрель 2018 г.). «Архаеллум: обновление уникальной структуры подвижности архей». Тенденции в микробиологии. 26 (4): 351–362. Дои:10.1016 / j.tim.2018.01.004. PMID 29452953.
  22. ^ Банерджи А., Цай К.Л., Чаудхури П., Трипп П., Арваи А.С., Исида Дж. П. и др. (Май 2015 г.). «FlaF представляет собой β-сэндвич-белок, который закрепляет архаеллу в оболочке архей, связывая белок S-слоя». Структура. 23 (5): 863–872. Дои:10.1016 / j.str.2015.03.001. ЧВК 4425475. PMID 25865246.
  23. ^ Цай К.Л., Трипп П., Сивабаласарма С., Чжан С., Родригес-Франко М., Випфлер Р.Л. и др. (Январь 2020 г.). «Структура периплазматического комплекса FlaG-FlaF и его важная роль в архаеллярной плавательной моторике». Природная микробиология. 5 (1): 216–225. Дои:10.1038 / s41564-019-0622-3. ЧВК 6952060. PMID 31844299.
  24. ^ Schlesner M, Miller A, Streif S, Staudinger WF, Müller J, Scheffer B и др. (Март 2009 г.). «Идентификация белков хемотаксиса, специфичных для архей, которые взаимодействуют с жгутиковым аппаратом». BMC Microbiology. 9: 56. Дои:10.1186/1471-2180-9-56. ЧВК 2666748. PMID 19291314.
  25. ^ Quax TE, Albers SV, Pfeiffer F (декабрь 2018 г.). Робинсон Н.П. (ред.). «Такси в архее». Новые темы наук о жизни. 2 (4): 535–46. Дои:10.1042 / ETLS20180089. ISSN 2397-8554. ЧВК 7289035.
  26. ^ Алам М., Оестерхельт Д. (июль 1984 г.). «Морфология, функция и выделение жгутиков галобактерий». Журнал молекулярной биологии. 176 (4): 459–75. Дои:10.1016/0022-2836(84)90172-4. PMID 6748081.
  27. ^ Марван В., Алам М., Остерхельт Д. (март 1991 г.). «Вращение и переключение узла жгутикового мотора в Halobacterium halobium». Журнал бактериологии. 173 (6): 1971–7. Дои:10.1128 / jb.173.6.1971-1977.1991. ЧВК 207729. PMID 2002000.
  28. ^ Фаги Д.М., Джаррелл К.Ф., Кузио Дж., Калмоков М.Л. (январь 1994 г.). «Молекулярный анализ архаичных флагеллинов: сходство с суперсемейством пилин-транспорта IV типа, широко распространенным у бактерий». Канадский журнал микробиологии. 40 (1): 67–71. Дои:10.1139 / m94-011. PMID 7908603.
  29. ^ Джаррелл К.Ф., Джонс Г.М., Кандиба Л., Наир Д.Б., Эйхлер Дж. (Июль 2010 г.). «Гликопротеины и флагеллины S-слоя: репортеры посттрансляционных модификаций архей». Археи. 2010: 1–13. Дои:10.1155/2010/612948. ЧВК 2913515. PMID 20721273.
  30. ^ Meyer BH, Zolghadr B, Peyfoon E, Pabst M, Panico M, Morris HR и др. (Декабрь 2011 г.). «Сульфохиновозосинтаза - важный фермент в пути N-гликозилирования Sulfolobus acidocaldarius». Молекулярная микробиология. 82 (5): 1150–63. Дои:10.1111 / j.1365-2958.2011.07875.x. ЧВК 4391026. PMID 22059775.
  31. ^ а б Мещеряков В.А., Шибата С., Шрайбер М.Т., Виллар-Брионес А., Джаррелл К.Ф., Айзава С.И., Вольф М. (май 2019 г.). «Структура архаеллы высокого разрешения показывает консервативный сайт связывания металла». EMBO отчеты. 20 (5). Дои:10.15252 / наб.201846340. ЧВК 6500986. PMID 30898768.
  32. ^ Коэн-Краус С., Трахтенберг С. (август 2002 г.). «Структура археабактериального филамента жгутика крайнего галофила Halobacterium salinarum R1M1 и его связь с филаментами жгутика эубактерий и пилями IV типа». Журнал молекулярной биологии. 321 (3): 383–95. Дои:10.1016 / S0022-2836 (02) 00616-2. PMID 12162953.
  33. ^ Poweleit N, Ge P, Nguyen HH, Loo RR, Gunsalus RP, Zhou ZH (декабрь 2016 г.). «КриоЭМ-структура Methanospirillum hungatei archaellum выявляет структурные особенности, отличные от бактериального жгутика и ворса IV типа». Природная микробиология. 2 (3): 16222. Дои:10.1038 / nmicrobiol.2016.222. ЧВК 5695567. PMID 27922015.
  34. ^ Трахтенберг С., Галкин В.Е., Эгельман Э.Х. (февраль 2005 г.). «Уточнение структуры филамента жгутика Halobacterium salinarum с использованием метода итеративной спиральной реконструкции реального пространства: понимание полиморфизма». Журнал молекулярной биологии. 346 (3): 665–76. Дои:10.1016 / j.jmb.2004.12.010. PMID 15713454.
  35. ^ Трахтенберг С., Коэн-Краус С. (2006). "Нить жгутика архей и бактерий: бактериальный пропеллер со структурой, подобной пилюсу". Журнал молекулярной микробиологии и биотехнологии. 11 (3–5): 208–20. Дои:10.1159/000094055. PMID 16983196. S2CID 21962186.
  36. ^ Макнаб Р.М. (1992). «Генетика и биогенез бактериальных жгутиков». Ежегодный обзор генетики. 26: 131–58. Дои:10.1146 / annurev.ge.26.120192.001023. PMID 1482109.
  37. ^ Джаррелл К.Ф., Бейли Д.П., Костюкова А.С. (сентябрь 1996 г.). «Жгутик архей: уникальная структура подвижности». Журнал бактериологии. 178 (17): 5057–64. Дои:10.1128 / JB.178.17.5057-5064.1996. ЧВК 178298. PMID 8752319.
  38. ^ Рейндл С., Гош А., Уильямс Г.Дж., Лассак К., Найнер Т., Хенче А.Л. и др. (Март 2013 г.). «Понимание функций FlaI в сборке и моторике архей на основе структур, конформаций и генетики». Молекулярная клетка. 49 (6): 1069–82. Дои:10.1016 / j.molcel.2013.01.014. ЧВК 3615136. PMID 23416110.
  39. ^ Алам М., Клавьез М., Оестерхелт Д., Кессель М. (декабрь 1984 г.). «Жгутики и подвижность квадратных бактерий». Журнал EMBO. 3 (12): 2899–903. Дои:10.1002 / j.1460-2075.1984.tb02229.x. ЧВК 557786. PMID 6526006.
  40. ^ Херцог Б., Вирт Р. (март 2012 г.). «Плавательное поведение избранных видов архей». Прикладная и экологическая микробиология. 78 (6): 1670–4. Дои:10.1128 / AEM.06723-11. ЧВК 3298134. PMID 22247169.
  41. ^ Сабо З, Сани М., Гроеневельд М., Золгадр Б., Шелерт Дж., Альберс С.В. и др. (Июнь 2007 г.). «Подвижность и структура жгутиков у гипертермоацидофильных архей Sulfolobus solfataricus». Журнал бактериологии. 189 (11): 4305–9. Дои:10.1128 / JB.00042-07. ЧВК 1913377. PMID 17416662.
  42. ^ Джаррелл К.Ф., Бейли Д.П., Флориан В., Кляйн А. (май 1996 г.). «Выделение и характеристика инсерционных мутаций в генах флагеллина в архее Methanococcus voltae». Молекулярная микробиология. 20 (3): 657–66. Дои:10.1046 / j.1365-2958.1996.5371058.x. PMID 8736544.
  43. ^ Хенрихсен Дж (декабрь 1972 г.). «Бактериальная поверхностная транслокация: обзор и классификация». Бактериологические обзоры. 36 (4): 478–503. Дои:10.1128 / MMBR.36.4.478-503.1972. ЧВК 408329. PMID 4631369.
  44. ^ Джаррелл К.Ф., Макбрайд MJ (июнь 2008 г.). «Удивительно разнообразные способы передвижения прокариотов». Обзоры природы. Микробиология. 6 (6): 466–76. Дои:10.1038 / nrmicro1900. PMID 18461074.
  45. ^ Näther DJ, Рэйчел Р., Ваннер Дж., Вирт Р. (октябрь 2006 г.). «Жгутики Pyrococcus furiosus: многофункциональные органеллы, предназначенные для плавания, адгезии к различным поверхностям и межклеточных контактов». Журнал бактериологии. 188 (19): 6915–23. Дои:10.1128 / JB.00527-06. ЧВК 1595509. PMID 16980494.
  46. ^ Золгадр Б., Клингл А., Кердт А., Дриссен А.Дж., Рэйчел Р., Альберс С.В. (январь 2010 г.). «Поверхностная адгезия Sulfolobus solfataricus, опосредованная придатком». Журнал бактериологии. 192 (1): 104–10. Дои:10.1128 / JB.01061-09. ЧВК 2798249. PMID 19854908.
  47. ^ Кёрдт А., Гёдеке Дж., Бергер Дж., Торманн К.М., Альберс С.В. (ноябрь 2010 г.). «Образование кренархейной биопленки в экстремальных условиях». PLOS ONE. 5 (11): e14104. Bibcode:2010PLoSO ... 514104K. Дои:10.1371 / journal.pone.0014104. ЧВК 2991349. PMID 21124788.