WikiDer > Альбумин бычьей сыворотки - Википедия

Bovine serum albumin - Wikipedia
Эта статья об альбумине, характерном для коров. Для человеческого варианта см. человеческий сывороточный альбумин. Для семейства альбуминов млекопитающих см. сывороточный альбумин.
альбумин
Кристаллическая структура бычьего сывороточного альбумина 3v03.jpg
Идентификаторы
ОрганизмBos taurus (домашняя корова)
СимволALB
Entrez280717
HomoloGene105925
RefSeq (мРНК)NM_180992
RefSeq (Prot)NP_851335
UniProtP02769
Прочие данные
Хромосома6: 91.54 - 91.57 Мб

Бычий сывороточный альбумин (BSA или же «Фракция V») это сывороточный альбумин белок, полученный от коров. Он часто используется в качестве стандарта концентрации белка в лабораторных экспериментах.

Прозвище «Фракция V» относится к альбумину, являющемуся пятой фракцией оригинала. Методология очистки Эдвина Кона который использовал дифференциальные характеристики растворимости белки плазмы. Изменяя концентрацию растворителя, pH, соль уровни и температура, Кон смог вытащить последовательные «фракции» плазма крови. Этот процесс был сначала коммерциализирован с человеческим альбумином для медицинского использования, а затем адаптирован для производства BSA.

Лиофилизированный альбумин бычьей сыворотки

Характеристики

Полноразмерный белок-предшественник БСА имеет длину 607 аминокислот (АК). An N-концевой 18-остаток сигнальный пептид при секреции отщепляется от белка-предшественника, следовательно, исходный белковый продукт содержит 589 аминокислотных остатков. Еще шесть аминокислот расщепляются с образованием зрелого белка BSA, который содержит 583 аминокислоты.[1]

ПептидПозицияДлина (AA)МВт Да
Предшественник полной длины 1 – 60760769,324
Сигнальный пептид 1 –  18182,107
Пропептид19 –  246478
Зрелый белок25 – 60758366,463

Физические свойства BSA:

  • Количество аминокислотных остатков: 583
  • Молекулярный вес: 66 463Да (= 66,5 кДа)
  • изоэлектрическая точка в воде при 25 ° C: 4,7[2]
  • Коэффициент ослабления 43824 M−1см−1 на 279 нм[3]
  • Размеры: 140 × 40 × 40 Å (вытянутый эллипсоид, где a = b [4]
  • pH 1% раствора: 5,2-7 [5][6]
  • Оптическое вращение: [α]259: -61 °; [α]264: -63°[5][6]
  • Радиус Стокса (rs): 3,48 нм[7]
  • Константа седиментации, S20, Вт × 1013: 4,5 (мономер), 6,7 (димер)[5][6]
  • Константа диффузии, D20, Вт × 10−7 см2/ с: 5,9[5][6]
  • Частичный удельный объем, В20: 0.733[5][6]
  • Характеристическая вязкость, η: 0,0413[5][6]
  • Коэффициент трения, f / f0: 1,30[5][6]
  • Приращение показателя преломления (578 нм) × 10−3: 1.90[5][6]
  • Оптическое поглощение, А279 нм1 г / л: 0.667[5][6]
  • Среднее вращение остатка, [м ']233: 8443[5][6]
  • Эллиптичность среднего остатка: 21,1 [θ]209 нм; 20,1 [θ]222 нм[5][6]
  • Расчетная a-спираль,%: 54[5][6]
  • Расчетная b-форма,%: 18[5][6]

Приложения

BSA имеет множество биохимических применений, включая ELISA (Иммуноферментный анализ), иммуноблоты и иммуногистохимия. Поскольку БСА представляет собой небольшой, стабильный, умеренно инертный белок, его часто используют в качестве блокатора в иммуногистохимии.[8] Во время иммуногистохимии, которая представляет собой процесс, в котором используются антитела для идентификации антигенов в клетках, срезы тканей часто инкубируются с блокаторами BSA для связывания неспецифических участков связывания.[9][10] Это связывание BSA с неспецифическими сайтами связывания увеличивает вероятность того, что антитела будут связываться только с интересующими антигенами.[11] Блокатор БСА улучшает чувствительность за счет уменьшения фонового шума, поскольку участки покрыты умеренно нереактивным белком.[12][13] Во время этого процесса минимизация неспецифического связывания антител важна для получения наивысшего отношения сигнал / шум.[12] BSA также используется в качестве питательного вещества в культуре клеток и микробов. В ограничительные дайджесты, BSA используется для стабилизации некоторых ферментов во время переваривания ДНК и для предотвращения прилипания фермента к реакционным пробиркам, наконечникам пипеток и другим сосудам.[14] Этот белок не влияет на другие ферменты которые не нуждаются в стабилизации. BSA также обычно используется для определения количества других белков путем сравнения неизвестного количества белка с известным количеством BSA (см. Брэдфордский анализ белка). БСА используется из-за его способности усиливать сигнал в анализах, его отсутствия эффекта во многих биохимических реакциях и его низкой стоимости, поскольку его можно легко очистить из бычьей крови, побочного продукта животноводства. Еще одно применение BSA заключается в том, что его можно использовать для временного выделения веществ, которые блокируют активность необходимого фермента, тем самым препятствуя полимеразной цепной реакции (ПЦР).[15] BSA широко используется в качестве шаблона для синтеза наноструктур.[16]

BSA также является основным компонентом фетальная бычья сыворотка, обычная среда для культивирования клеток.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Майорек К.А., Поребски П.Дж., Дайал А., Циммерман М.Д., Яблонска К., Стюарт А.Дж., Хрущ М., Минор В. (октябрь 2012 г.). «Структурная и иммунологическая характеристика альбуминов сыворотки крупного рогатого скота, лошади и кролика». Молекулярная иммунология. 52 (3–4): 174–82. Дои:10.1016 / j.molimm.2012.05.011. ЧВК 3401331. PMID 22677715.
  2. ^ Ге С., Кодзио К., Такахара А., Кадзияма Т. (1998). «Адсорбция бычьего сывороточного альбумина на иммобилизованной поверхности органотрихлорсилана: влияние фазового разделения на характер адсорбции белка». Журнал науки о биоматериалах, полимерное издание. 9 (2): 131–50. Дои:10.1163 / 156856298x00479. PMID 9493841.
  3. ^ Петерс Т. (1975). Путман Ф.В. (ред.). Белки плазмы. Академическая пресса. С. 133–181.
  4. ^ Райт А.К., Томпсон М.Р. (февраль 1975 г.). «Гидродинамическая структура бычьего сывороточного альбумина, определяемая кратковременным двойным лучепреломлением». Биофизический журнал. 15 (2 Pt 1): 137–41. Дои:10.1016 / S0006-3495 (75) 85797-3. ЧВК 1334600. PMID 1167468.
  5. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м Патнэм Ф.В. (1975). Белки плазмы: структура, функция и генетический контроль. 1 (2-е изд.). Нью-Йорк: Academic Press. С. 141, 147. КАК В B007ESU1JQ.
  6. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м «Альбумин из бычьей сыворотки» (PDF). Сигма-Олдрич. Получено 5 июля 2013.
  7. ^ Аксельссон I (май 1978 г.). «Характеристика белков и других макромолекул с помощью хроматографии на агарозном геле». Журнал хроматографии А. 152 (1): 21–32. Дои:10.1016 / S0021-9673 (00) 85330-3.
  8. ^ «Сывороточные альбумины и аллергия». База знаний по структурной биологии. Национальный институт общих медицинских наук Национальных институтов здравоохранения. Октябрь 2013.
  9. ^ «Что такое иммуногистохимия (ИГХ)». Иммуногистохимия. Sino Biological Inc.
  10. ^ Farwell AP, Dubord-Tomasetti SA (сентябрь 1999 г.). «Гормон щитовидной железы регулирует экспрессию ламинина в развивающемся мозжечке крысы». Эндокринология. 140 (9): 4221–7. Дои:10.1210 / en.140.9.4221. PMID 10465295.
  11. ^ >. «Советы по уменьшению фона ELISA». Biocompare. Сравните сети. 8 октября 2012 г.
  12. ^ а б Уэлле, Мишель (24 декабря 2006 г.). «Как блокирование работает в иммуноцитохимическом анализе с сывороткой или BSA». Сеть MadSci: Биохимия. Сеть MadSci.
  13. ^ «Blocker ™ BSA (10X) в PBS». Thermo Fisher Scientific. Thermo Fisher Scientific Inc. Архивировано с оригинал на 30.03.2017.
  14. ^ "BSA FAQ". Invitrogen. Архивировано из оригинал на 2011-12-28. Получено 19 января 2012.
  15. ^ Kreader CA (март 1996 г.). «Снятие ингибирования амплификации в ПЦР с бычьим сывороточным альбумином или белком гена 32 Т4». Прикладная и экологическая микробиология. 62 (3): 1102–6. ЧВК 167874. PMID 8975603.
  16. ^ Рахмани Т., Хаджиан А., Афхами А., Багери Х. (2018). «Новый и высокоэффективный сенсорный слой без ферментов для электрохимического обнаружения метилпаратиона на основе биметаллических нанокластеров Au – Ag, созданных на основе BSA». Новый журнал химии. 42 (9): 7213–22. Дои:10.1039 / C8NJ00425K.

дальнейшее чтение

внешняя ссылка