WikiDer > Физиологический раствор с фосфатным буфером
Физиологический раствор с фосфатным буфером (сокращенно PBS) это буферный раствор обычно используется в биологические исследования. Это солевой раствор на водной основе, содержащий гидрофосфат динатрия, хлорид натрия и, в некоторых составах, хлористый калий и дигидрофосфат калия. Буфер помогает поддерживать постоянный pH. В осмолярность и концентрации ионов в растворах соответствуют таковым в организме человека (изотонический).
Приложения
PBS имеет множество применений, потому что он изотоничен и не токсичен для большинства клеток. Эти виды применения включают разбавление веществ и промывку контейнеров для клеток. PBS с EDTA также используется для разъединения прикрепленных и слипшихся ячеек. Двухвалентные металлы такие как цинкоднако добавлять нельзя, так как это приведет к выпадению осадков. Для таких приложений Буферы Гуда рекомендуются. Было показано, что PBS является приемлемой альтернативой вирусной транспортной среде в отношении транспорта и хранения РНК-вирусов, таких как SARS-CoV-2.[1]
Подготовка
Есть много разных способов приготовления растворов PBS (один из них - Дульбекко фосфатно-солевой буфер (DPBS), который имеет тот же состав, что и стандартный PBS[2]). Некоторые составы не содержат калий и магний, в то время как другие содержат кальций и / или магний (в зависимости от того, используется ли буфер на живой или фиксированной ткани: последний не требует KCl или MgCl.2 ).
| Поваренная соль | Концентрация (ммоль / л) | Концентрация (г / л) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| Na2HPO4 | 10 | 1.44 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Начните с 800 мл дистиллированной воды, чтобы растворить все соли. Добавьте дистиллированную воду до общего объема 1 литр. Полученный 1 × PBS будет иметь конечную концентрацию 157 мМ Na.+, 140 мМ Cl−, 4,45 мМ К+, 10,1 мМ HPO42−, 1,76 мМ H2PO4− и pH 7,96. Добавьте 2,84 мМ HCl, чтобы сместить буфер до 7,3 мМ HPO.42− и 4,6 мМ H2PO4− для конечного pH 7,4 и Cl− концентрация 142 мМ.
| реагент | МВт | масса (г) 10 × | [M] 10 × | масса (г) 5 × | [M] 5 × | масса (г) 1 × | [M] 1 × |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Na2HPO4 | 141.95897 | 14.1960 | 0.1000 | 7.0980 | 0.0500 | 1.41960 | 0.0100 |
| KH2PO4 | 136.08569 | 2.4496 | 0.0180 | 1.2248 | 0.0090 | 0.24496 | 0.0018 |
| NaCl | 58.44300 | 80.0669 | 1.3700 | 40.0335 | 0.6850 | 8.00669 | 0.1370 |
| KCl | 74.55150 | 2.0129 | 0.0270 | 1.0064 | 0.0135 | 0.20129 | 0.0027 |
| pH = 7,4 |
PH PBS составляет ~ 7,4. При приготовлении буферных растворов рекомендуется всегда измерять pH напрямую с помощью pH-метра. При необходимости pH можно отрегулировать с помощью соляной кислоты или гидроксида натрия.
PBS также может быть приготовлен с использованием коммерческих таблеток или пакетов с буфером PBS.[4]
Если используется для культивирования клеток, раствор может быть разделен на аликвоты и стерилизован автоклавирование или фильтрация. В зависимости от использования стерилизация может не потребоваться. PBS можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике. Однако концентрированные исходные растворы могут осадок при охлаждении и перед применением выдерживать при комнатной температуре до полного растворения осадка.
Смотрите также
использованная литература
- ^ Perchetti, G.A .; и другие. (2020). «Стабильность РНК SARS-CoV-2 в фосфатно-солевом буфере». Журнал клинической микробиологии. 58 (8): e01094-20. Дои:10.1128 / JCM.01094-20. ЧВК 7383534. PMID 32414839.
- ^ Dulbecco, R .; и другие. (1954). «Образование налета и выделение чистых линий с вирусами полиомиелита». J. Exp. Med. 99 (2): 167–182. Дои:10.1084 / jem.99.2.167. ЧВК 2180341. PMID 13130792.
- ^ Протокол CSH: рецепт фосфатно-солевого буфера (PBS)
- ^ Medicago AB, (2010) Технические характеристики физиологического раствора с фосфатным буфером