WikiDer > Анализ представительных различий

Эта статья поднимает множество проблем. Пожалуйста помоги Улучши это или обсудите эти вопросы на страница обсуждения. (Узнайте, как и когда удалить эти сообщения-шаблоны) Эта статья требует внимания специалиста по биохимии. Пожалуйста, добавьте причина или разговаривать в этот шаблон, чтобы объяснить проблему со статьей. ВикиПроект Биохимия может помочь нанять эксперта. (Ноябрь 2008 г.) Эта статья включает Список ссылок, связанное чтение или внешняя ссылка, но его источники остаются неясными, потому что в нем отсутствует встроенные цитаты. Пожалуйста, помогите улучшать эта статья введение более точные цитаты. (Ноябрь 2008 г.) (Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения) (Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения)

Анализ представительных различий (RDA) - это метод, используемый в биологических исследованиях для поиска различий в последовательностях двух геномный или же кДНК образцы. Геномы или последовательности кДНК из двух образцов (т.е. рак образец и нормальный образец) являются ПЦР усилены и различия проанализированы с использованием субтрактивная гибридизация ДНК. Эта технология была усовершенствована за счет разработки представление олигонуклеотидного микроматричного анализа (ROMA), который использует множество технология для выполнения таких анализов. Этот метод также может быть адаптирован для обнаружения различий в метилировании ДНК, как показано на анализ репрезентативных различий, чувствительный к метилированию (MS-RDA).^[1]

Теория

Этот метод основан на ПЦР для дифференциальной амплификации негомологичных участков ДНК между переваренными фрагментами двух почти идентичных видов ДНК, которые называются «драйверной» и «тестовой» ДНК. Обычно тестирующая ДНК содержит интересующую последовательность, не гомологичную драйверной ДНК. Когда два вида смешиваются, в тестер добавляется избыточная последовательность драйвера. Во время ПЦР двухцепочечные фрагменты сначала денатурируют при температуре ~ 95 ° C, а затем повторно отжигаются при воздействии температуры отжига. Поскольку последовательности драйвера и тестера почти идентичны, избыток фрагментов драйверной ДНК будет отжигаться с гомологичными фрагментами ДНК из тестируемых видов. Это блокирует амплификацию ПЦР и не увеличивает количество гомологичных фрагментов. Однако фрагменты, которые различаются между двумя видами, не будут отжигаться с комплементарным аналогом и будут амплифицированы с помощью ПЦР. По мере выполнения большего числа циклов RDA пул копий фрагментов уникальной последовательности будет расти быстрее, чем фрагменты, обнаруженные у обоих видов.

Рекомендации

• Лисицын Н., Лисицын Н., Виглер М. (1993), Клонирование различий между двумя сложными геномами. Наука, 259, 946-951

внешняя ссылка

• Обзор на fullerton.edu