WikiDer > Юго-западное пятно

Southwestern blot

В юго-западное пятно, на основе Саузерн-блот и впервые описан Б. Боуэном, Дж. Стейнбергом и коллегами в 1980 г.[1] это лабораторный метод, который включает идентификацию и характеристику ДНК-связывающих белков (белки это привязано к ДНК)[2] по их способности связываться со специфическими олигонуклеотидными зондами. Белки разделены гель-электрофорез и впоследствии передаются нитроцеллюлоза мембраны, аналогичные другим видам блоттинга.

Название юго-западное блоттинг основан на том факте, что этот метод обнаруживает ДНК-связывающие белки, поскольку обнаружение ДНК осуществляется Саузерн-блоттинг и обнаружение белков осуществляется вестерн-блоттинг.

Однако со времени первых юго-западных пятен было предложено и обнаружено гораздо больше. Первым протоколам мешала необходимость в большом количестве белки и их восприимчивость к деградация будучи изолированным.

«Юго-западное блот-картирование» выполняется для быстрой характеристики как ДНК-связывающих белков, так и их конкретных участков на геномной ДНК. Белки разделяются на полиакриламид гель (СТРАНИЦА) содержащий додецилсульфат натрия (SDS), ренатурировали путем удаления SDS в присутствии мочевины и наносили на нитроцеллюлоза путем диффузии. Интересующий участок геномной ДНК переваривается рестрикционные ферменты выбранные для получения фрагментов подходящего, но разного размера, которые впоследствии метят на конце и позволяют связываться с разделенными белками. Специфически связанная ДНК элюируется из каждого индивидуального комплекса белок-ДНК и анализируется электрофорезом в полиакриламидном геле. Были представлены доказательства того, что тканеспецифические связывающие ДНК белки могут быть обнаружены с помощью этого метода. Более того, их специфическое для последовательности связывание позволяет очистить соответствующие избирательно связанные фрагменты ДНК и может улучшить опосредованное белком клонирование регуляторных последовательностей ДНК.

Рекомендации

  1. ^ Bowen B, Steinberg J, Laemmli UK, Weintraub H (январь 1980 г.). «Обнаружение ДНК-связывающих белков с помощью белкового блоттинга». Нуклеиновые кислоты Res. 8 (1): 1–20. Дои:10.1093 / nar / 8.1.1. ЧВК 327239. PMID 6243775.
  2. ^ Юго-западный + пятно в Национальной медицинской библиотеке США Рубрики медицинской тематики (MeSH)