WikiDer > Макрофаг, полученный из костного мозга

Bone marrow-derived macrophage

Из костного мозга макрофаг (BMDM) относится к макрофаг клетки, созданные в исследовательской лаборатории из млекопитающих Костный мозг клетки.[1][2][3] BMDM могут дифференцироваться в зрелые макрофаги в присутствии факторы роста и другие сигнальные молекулы.[1][2] Недифференцированные клетки костного мозга культивируют в присутствии колониестимулирующий фактор макрофагов (M-CSF; CSF-1).[3] M-CSF - это цитокин и фактор роста, ответственный за распространение и приверженность миелоидный прародители в моноциты (которые затем созревают в макрофаги).[3][4] Макрофаги выполняют в организме самые разные функции, включая: фагоцитоз чужеродных захватчиков и другого клеточного мусора, высвобождая цитокины для запуска иммунных ответов и презентации антигена.[2] BMDM обеспечивают большую гомогенную популяцию макрофагов, которые играют все более важную роль в обеспечении возможности и финансовой осуществимости исследований, связанных с макрофагами.[5]

Производство

Схема производства БМДМ in vitro

Чтобы производить БМДМ, мезенхимальные стволовые клетки удаляются из большеберцовой или бедренной кости мышей.[6] Поскольку BMDM происходят из костного мозга, изъятые клетки являются здоровыми и наивными (или неактивированными), независимо от состояния мышей-доноров.[5] После удаления стволовые клетки инкубируют с CSF-1.[6] Без CSF-1 клетки переходят в неактивное состояние, но могут возобновить рост и дифференцировку, если стимулировать их позже.[6] Зрелые макрофаги и фибробласты, которые могут нести нежелательные факторы роста, удаляются.[6] Следующий, Ил-3 и Ил-1, два фактора роста, часто добавляют для увеличения урожайности и ускорения терминальной дифференциации.[6] Также необходимо добавлять экзогенные среды, содержащие факторы роста и другие сыворотки, чтобы клетки оставались жизнеспособными.[6] Полный рост и дифференциация занимают примерно 5–8 дней.[6]

Миллионы BMDM могут быть получены от одной мыши и могут быть заморожены на годы. После размораживания BMDM могут реагировать на различные раздражители, такие как LPS, IFN-γ, PAMPs, NF-κB, и IRF3.[1][5][7] Эти сигналы вызывают трансляцию генов, продуцирующих цитокины, и определяют, являются ли макрофаги M1 (провоспалительными) или M2 (противовоспалительными).[2] Если BMDM не замораживать, они стареют и становятся менее жизнеспособными, так как CSF-1 и факторы роста в их средах уменьшаются.[1]

Пролиферацию BMDM также можно ингибировать рядом реагентов.[6] Например, рост и дифференцировка зависят от CSF-1 и функционального рецептора CSF-1, члена тирозинкиназа семья.[6] Без функциональных рецепторов CSF-1 стволовые клетки не могут отвечать на стимулы CSF-1 и, следовательно, не могут дифференцироваться; интерфероны может вызвать понижающую регуляцию рецептора CSF-1.[6] Кроме того, без стимулов, таких как LPS, для индукции созревания макрофагов до M1 или M2, мыши накапливают большой пул моноциты, клетки-предшественники макрофагов, которые менее полезны для исследований, связанных с макрофагами.[6]

Рекомендации

  1. ^ а б c d Барретт Дж. П., Костелло Д. А., О'Салливан Дж., Коули Т. Р., Линч Массачусетс (апрель 2015 г.). «Макрофаги, полученные из костного мозга старых крыс, более чувствительны к воспалительным раздражителям». Журнал нейровоспаления. 12 (1): 67. Дои:10.1186 / s12974-015-0287-7. ЧВК 4397943. PMID 25890218.
  2. ^ а б c d Ли, Юэ; Ниу, Шисянь; Си, Далин; Чжао, Шуци; Сунь, Цзян; Цзян, Юн; Лю, Цзинхуа (2019). «Различия в воспалительной реакции, вызванной липополисахаридами, между эмбриональными фибробластами мыши и макрофагами, полученными из костного мозга». Журнал исследований интерферона и цитокинов. 39 (6): 375–382. Дои:10.1089 / jir.2018.0167. ISSN 1557-7465. PMID 30990360.
  3. ^ а б c Weischenfeldt J, Porse B (декабрь 2008 г.). «Макрофаги, полученные из костного мозга (BMM): выделение и применение». Протоколы CSH. 2008 (12): pdb.prot5080. Дои:10.1101 / pdb.prot5080. PMID 21356739.
  4. ^ Гамильтон, Томас А .; Чжао, Чэньян; Павичич, Пол Г .; Датта, Шьямасри (21 ноября 2014 г.). «Миелоидные колониестимулирующие факторы как регуляторы поляризации макрофагов». Границы иммунологии. 5: 554. Дои:10.3389 / fimmu.2014.00554. ISSN 1664-3224. ЧВК 4240161. PMID 25484881.
  5. ^ а б c Марим, Фернанда М .; Сильвейра, Татьяна Н .; Lima, Djalma S .; Замбони, Дарио С. (17 декабря 2010 г.). «Способ получения макрофагов, происходящих из костного мозга, из криоконсервированных клеток костного мозга мыши». PLOS One. 5 (12): e15263. Bibcode:2010PLoSO ... 515263M. Дои:10.1371 / journal.pone.0015263. ISSN 1932-6203. ЧВК 3003694. PMID 21179419.
  6. ^ а б c d е ж грамм час я j k Хьюм, Д. А .; Allan, W .; Fabrus, B .; Weidemann, M. J .; Hapel, A.J .; Бартельмез, С. (1987). «Регулирование пролиферации макрофагов, происходящих из костного мозга». Лимфокиновые исследования. 6 (2): 127–139. ISSN 0277-6766. PMID 3035291.
  7. ^ Oppong-Nonterah, Gertrude O .; Лахдари, Омар; Ямамура, Асами; Хоффман, Хэл М .; Принц, Лоуренс С. (2019). «Активация TLR изменяет дифференцировку макрофагов, полученных из костного мозга». Журнал врожденного иммунитета. 11 (1): 99–108. Дои:10.1159/000494070. ISSN 1662-8128. ЧВК 6296861. PMID 30408777.