WikiDer > Прерывистый электрофорез

Discontinuous electrophoresis
Полосы ДНК после электрофореза

Прерывистый электрофорез (в просторечии дисковый электрофорез) является разновидностью полиакриламид гель-электрофорез. Его разработали Орнштейн и Дэвис.[1] Этот метод обеспечивает высокое разрешение и хорошую четкость полосы. Это широко используемый метод разделения белков по размеру и заряду.[2]

Метод

В этом методе гель делится на две части, разделяющий и укладывающий гель, обе имеют разные концентрации полиакриламида.[3] Один с более низкой концентрацией кладется поверх другого с более высокой концентрацией. Прерывистость основана на четырех параметрах: структуре геля, значении pH буфера, ионной силе буфера и природе ионов в геле и электродном буфере. Электродный буфер содержит глицин. Глицин имеет очень низкий чистый заряд при pH 6,8 укладывающегося геля, поэтому он имеет низкий мобильность. Белки разделяются по принципу изотахофорез и формируют стопки в порядке мобильности (эффект суммирования). Подвижность зависит от чистого заряда, а не от размера молекулы. Белки движутся навстречу анод медленно с постоянной скоростью, пока не достигнут предел разделения геля. Внезапно сопротивление трения увеличивается, но на глицин это не влияет, он проходит через белки и становится сильно заряженным в зоне разделения. Белки присутствуют в однородный буфер начать разделять на принципах зонного электрофореза. Теперь их мобильность зависит не только от размера, но и от заряда. Значение pH повышается до 9,5, а чистый заряд увеличивается.[4][5]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Уильямс, Дональд Э. и Райсфельд, Ральф А. (1964). «ДИСК-электрофорез в полиакриламидных гелях». Летопись Нью-Йоркской академии наук. 121 (2): 372–381. Bibcode:1964НЯСА.121..373W. Дои:10.1111 / j.1749-6632.1964.tb14210.x. PMID 14240536.
  2. ^ Электрофорез в полиакриламидном геле (PDF). davidson.edu.
  3. ^ «Принцип дискового электрофореза». Архивировано из оригинал 29 июня 2016 г.. Получено 4 июля 2016.
  4. ^ Дисковый электрофорез и родственные методы электрофореза в полиакриламидном геле Автор Х. Р. Маурер, издание 2, иллюстрированное издательство Walter de Gruyter, 1978 ISBN 3110836203, 9783110836202
  5. ^ «МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА - Электрофорез».. Получено 4 июля 2016.

внешняя ссылка