WikiDer > Изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид - Википедия

Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside - Wikipedia
Изопропил β-d-1-тиогалактопиранозид
IPTG2.svg
Идентификаторы
3D модель (JSmol)
ChemSpider
ECHA InfoCard100.006.094 Отредактируйте это в Викиданных
MeSHИзопропил + тиогалактозид
UNII
Характеристики
C9ЧАС18О5S
Молярная масса238.30 г · моль−1
Если не указано иное, данные для материалов приводятся в их стандартное состояние (при 25 ° C [77 ° F], 100 кПа).
Ссылки на инфобоксы

Изопропил β-d-1-тиогалактопиранозид (IPTG) это молекулярная биология реагент. Это соединение является молекулярным аналогом аллолактоза, а лактоза метаболит это вызывает транскрипция из лак оперон, и поэтому он используется для индукции экспрессии белка там, где ген находится под контролем оператор lac.

Механизм действия

Как и аллолактоза, IPTG связывается с лак репрессор и освобождает тетрамерный репрессор от оператора lac в аллостерический таким образом, позволяя транскрипцию генов в lac-опероне, таких как ген, кодирующий бета-галактозидаза, фермент гидролаза, который катализирует гидролиз β-галактозидов до моносахаридов. Но в отличие от аллолактозы сера (S) атом создает химическую связь, которая не гидролизуется клеткой, не позволяя клетке метаболизировать или разрушать индуктор. Следовательно, его концентрация остается постоянной во время эксперимента.

Поглощение IPTG Кишечная палочка может быть независимым от действия лактозопермеаза, поскольку задействованы и другие транспортные пути.[1] В низкой концентрации IPTG проникает в клетки через пермеазу лактозы, но при высоких концентрациях (обычно используемых для индукции белка) IPTG может проникать в клетки независимо от пермеазы лактозы.[2]

Использование в лаборатории

При хранении в виде порошка при температуре 4 ° C или ниже IPTG стабилен в течение 5 лет. Он значительно менее устойчив в растворе; Sigma рекомендует хранить не более месяца при комнатной температуре.[3] IPTG - эффективный индуктор экспрессии белка в диапазоне концентраций 100 мкМ до 3,0 мМ. Обычно стерильный фильтрованный 1 М раствор IPTG добавляют в соотношении 1: 1000 к экспоненциально растущей бактериальной культуре, чтобы получить конечную концентрацию 1 мМ. Используемая концентрация зависит от силы необходимой индукции, а также от генотипа используемых клеток или плазмиды. Если lacIqЕсли присутствует мутант, который чрезмерно продуцирует lac-репрессор, то может потребоваться более высокая концентрация IPTG.[4]

В сине-белый экран, IPTG используется вместе с X-gal. Сине-белый экран позволяет идентифицировать в экспериментах по клонированию колонии, которые были трансформированы рекомбинантной плазмидой, а не нерекомбинантной.[нужна цитата]

Рекомендации

  1. ^ Хансен Л.Х., Кнудсен С., Соренсен С.Дж. (июнь 1998 г.). «Влияние гена lacY на индукцию индуцибельных промоторов IPTG, изученное в кишечная палочка и Pseudomonas fluorescens". Curr. Микробиол. 36 (6): 341–7. Дои:10.1007 / s002849900320. PMID 9608745. Архивировано из оригинал на 2000-10-18.
  2. ^ Марбах А, Беттенброк К (2012). «Индукция lac-оперона в Escherichia coli: систематическое сравнение индукции IPTG и TMG и влияние трансацетилазы LacA». Журнал биотехнологии. 157 (1): 82–8. Дои:10.1016 / j.jbiotec.2011.10.009. PMID 22079752.
  3. ^ https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Product_Information_Sheet/i5502pis.pdf
  4. ^ Компетентные клетки BL21 (DE3), компетентные клетки BL21 (DE3) pLysS и компетентные клетки BL21 Руководство по эксплуатации (Редакция # 066004e ред.). Ла-Хойя, Калифорния: Stratagene. 2006. с. 7.

внешняя ссылка