WikiDer > SNAP-тег

SNAP-tag
Схема реакции SNAP-тега

SNAP-тег представляет собой метку белка с собственной меткой, коммерчески доступную в различных векторах экспрессии. SNAP-tag представляет собой полипептид из 182 остатков (19,4 кДа), который может быть слит с любым белок представляющих интерес и дополнительно специфически и ковалентно помеченных подходящим лигандом, таким как флуоресцентный краситель. С момента своего появления SNAP-тег нашел множество применений в биохимия а также для исследования функции и локализации белков и ферменты в живых клетках.[1] По сравнению с существующими стандартными методами маркировки, используемыми в флуоресцентной микроскопии, использование SNAP-тегов дает значительные преимущества.

Приложения

Клеточная биология использует инструменты, которые позволяют манипулировать и визуализировать белки в живых клетках. Важным примером является использование флуоресцентных белков, таких как зеленый флуоресцентный белок (GFP) или желтый флуоресцентный белок (YFP). Методы молекулярной биологии позволяют вводить эти флуоресцентные белки и экспрессировать их в живых клетках в виде слитых белков. Однако фотофизические свойства флуоресцентных белков обычно не подходят для спектроскопии одиночных молекул. Флуоресцентные белки имеют, по сравнению с коммерчески доступными красителями, гораздо более низкий квантовый выход флуоресценции и быстро разрушаются при возбуждении сфокусированным лазерным лучом (фотообесцвечивание).

Белок SNAP-tag представляет собой сконструированную версию широко распространенного фермента AGT млекопитающих,[2] кодируется у людей О-6-метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза (MGMT) ген. SNAP-тег был получен с использованием стратегии направленной эволюции[3], что приводит к варианту hAGT, который принимает О6производные -бензилгуанина вместо восстановления алкилированных производных гуанина в поврежденной ДНК.

Ортогональный тег, называемый CLIP-тегом, был дополнительно разработан из SNAP-тега для приема О2производные бензилцитозина в качестве субстратов вместо О6-бензилгуанин.[4] Позднее была разработана версия с расщепленной меткой SNAP, подходящая для анализа белковой комплементации и исследований белок-белкового взаимодействия.[5]

Помимо флуоресцентная микроскопия, Метка SNAP и метка CLIP оказались полезными для выяснения множества биологических процессов, включая идентификацию мультипротеиновые комплексы используя различные подходы, такие как FRET,[6] сшивание,[6] анализ близости лигирования.[7] Другое применение включает измерение периода полужизни белка in vivo,[8] и взаимодействия малых молекул с белками.[9]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Crivat G; Тараска Ю.В. (январь 2012 г.). «Визуализация белков внутри клеток с помощью флуоресцентных меток». Тенденции в биотехнологии. 30 (1): 8–16. Дои:10.1016 / j.tibtech.2011.08.002. ЧВК 3246539. PMID 21924508.
  2. ^ Жюльерат А; Гронемейер Т; Кепплер А; Gendreizig S; Выберите H; Vogel H; Джонссон К. (апрель 2003 г.). «Направленная эволюция O6-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы для эффективного мечения гибридных белков малыми молекулами in vivo». Химия и биология. 10 (4): 313–317. Дои:10.1016 / S1074-5521 (03) 00068-1. PMID 12725859.
  3. ^ Моллвиц, Биргит; Брюнк, Элизабет; Шмитт, Симона; Пойер, Флоренция; Баннварт, Майкл; Шильц, Марк; Ротлисбергер, Урсула; Джонссон, Кай (07.02.2012). «Направленная эволюция суицидного белка O6-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы для повышения реакционной способности приводит к получению алкилированного белка с исключительной стабильностью». Биохимия. 51 (5): 986–994. Дои:10.1021 / bi2016537. ISSN 0006-2960. PMID 22280500.
  4. ^ Готье А; Жюльерат А; Heinis C; Corrêa IR Jr; Киндерманн М; Beaufils F; Джонссон К. (февраль 2008 г.). «Разработанная белковая метка для мечения нескольких белков в живых клетках». Химия и биология. 15 (2): 128–136. Дои:10.1016 / j.chembiol.2008.01.007. PMID 18291317.
  5. ^ Mie M; Naoki T; Uchida K; Кобатаке Э (октябрь 2012 г.). «Разработка анализа комплементации белков с расщепленной меткой SNAP для визуализации белок-белковых взаимодействий в живых клетках». Аналитик. 137 (20): 4760–4765. Дои:10.1039 / c2an35762c. PMID 22910969. S2CID 6217675.
  6. ^ а б Maurel D; Компс-Аграр L; Brock C; Rives ML; Bourrier E; Ayoub MA; Bazin H; Tinel N; Durroux T; Prézeau L; Trinquet E; Pin JP (июнь 2008 г.). «Анализ взаимодействия белок-белок на поверхности клетки с использованием технологий FRET и snap-tag с временным разрешением: применение к олигомеризации GPCR». Методы природы. 5 (6): 561–567. Дои:10.1038 / nmeth.1213. ЧВК 2642604. PMID 18488035.
  7. ^ Gu GJ; Фридман М; Jost C; Johnsson K; Kamali-Moghaddam M; Plückthun A; Landegren U; Седерберг О. (январь 2013 г.). «Опосредованное белковой меткой конъюгация олигонуклеотидов с рекомбинантными аффинными связывающими веществами для лигирования близости». Новая биотехнология. 30 (2): 144–152. Дои:10.1016 / j.nbt.2012.05.005. PMID 22664266.
  8. ^ Бодор DL; Родригес М.Г.; Moreno N; Янсен Л.Е. (июнь 2012 г.). Анализ белкового обмена с помощью количественной импульсной визуализации на основе SNAP. Текущие протоколы в клеточной биологии. 55. С. Unit8.8. Дои:10.1002 / 0471143030.cb0808s55. HDL:10400.7/614. ISBN 978-0471143031. PMID 23129118.
  9. ^ Чидли С; Haruki H; Педерсен MG; Muller E; Джонссон К. (июнь 2011 г.). «Скрининг на основе дрожжей показывает, что сульфасалазин ингибирует биосинтез тетрагидробиоптерина». Природа Химическая Биология. 7 (6): 375–383. Дои:10.1038 / nchembio.557. PMID 21499265.

дальнейшее чтение

внешняя ссылка

  • Darstellung SNAP-Tag и CLIP-Tag (NEB)
  • Самомаркированные белковые бирки. В: Биофорум. Jg. 2005, № 6, С. 50-51.