WikiDer > Сверхчувствительность

Эта статья может содержать чрезмерное количество сложных деталей, которые могут заинтересовать только определенную аудиторию. Пожалуйста, помогите спиннинг или же переезд любая соответствующая информация и удаление лишних деталей, которые могут противоречить Политика включения Википедии. (Июнь 2019) (Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения)

В молекулярная биология, сверхчувствительность описывает выходной ответ, который более чувствителен к изменению стимула, чем гиперболический Ответ Михаэлиса-Ментен. Сверхчувствительность - одна из биохимические переключатели в клеточном цикле и был вовлечен в ряд важных клеточных событий, включая прекращение остановки клеточного цикла G2 в Xenopus laevis ооциты, стадия, к которой клетка или организм не хотят возвращаться.^[1]

Сверхчувствительность - это клеточная система, которая запускает переход в другое клеточное состояние.^[2] Сверхчувствительность дает слабую реакцию на первый входной сигнал, но увеличение входного сигнала дает все более и более высокие уровни выходного сигнала. Это действует для фильтрации шума, поскольку для триггера необходимы небольшие стимулы и пороговые концентрации стимула (входной сигнал), что позволяет системе быстро активироваться.^[3] Сверхчувствительные отклики представлены сигмоидальными графиками, которые напоминают сотрудничество. Количественная оценка сверхчувствительности часто выполняется приблизительно по Уравнение Хилла:

${ textstyle { ce {Response}} = {Стимул ^ {n} over ({ ce {EC50}} ^ {n} + Стимул ^ {n})}}$

Где коэффициент Хилла (n) может представлять собой количественную меру сверхчувствительного отклика.^[4]

Схема сверхчувствительного отклика (сплошная линия). Кривая Михаэля (пунктирная линия) включена для сравнения.

Историческое развитие

Сверхчувствительность нулевого порядка была впервые описана Альбертом Гольдбетером и Дэниел Кошланд младший в 1981 г. в статье в Труды Национальной академии наук.^[5] Они показали использование математическое моделирование эта модификация ферментов, действующих за пределами кинетики первого порядка, требовала лишь небольших изменений концентрации эффектора, чтобы произвести большие изменения в количестве модифицированного белка. Эта амплификация обеспечивала дополнительную чувствительность в биологическом контроле и подразумевала важность этого для многих биологических систем.

Многие биологические процессы являются бинарными (ВКЛ-ВЫКЛ), например, решения о судьбе клеток,^[6] метаболические состояния и сигнальные пути. Сверхчувствительность - это переключатель, который помогает принимать решения в таких биологических процессах.^[7] Например, в процессе апоптоза модель показала, что положительная обратная связь ингибирования каспазы 3 (Casp3) и Casp9 ингибиторами апоптоза может вызвать сверхчувствительность (бистабильность). Эта положительная обратная связь взаимодействует с Casp3-опосредованным расщеплением по обратной связи Casp9, чтобы вызвать необратимость активации каспазы (включить), что приводит к апоптозу клеток.^[8] Другая модель также показала аналогичные, но разные контроли положительной обратной связи в белках семейства Bcl-2 в процессе апоптоза.^[9]

Недавно Jeyeraman et al. предложили, что явление сверхчувствительности может быть далее подразделено на три подрежима, разделенных пороговыми значениями резких стимулов: ВЫКЛ, ВЫКЛ-ВКЛ-ВЫКЛ и ВКЛ. Основываясь на своей модели, они предположили, что этот подрежим сверхчувствительности, OFF-ON-OFF, похож на адаптацию, подобную переключателю, которая может быть достигнута путем соединения циклов N-фосфорилирования-дефосфорилирования в одном направлении, без каких-либо явных петель обратной связи.^[10]

В другой недавней работе подчеркивалось, что не только топология сетей важна для создания ответов сверхчувствительности, но и что их состав (ферменты против факторов транскрипции) сильно влияет на то, будут ли они проявлять устойчивую сверхчувствительность. Математическое моделирование предполагает, что для широкого спектра сетевых топологий комбинация ферментов и факторов транскрипции имеет тенденцию обеспечивать более устойчивую сверхчувствительность, чем та, которая наблюдается в сетях, полностью состоящих из факторов транскрипции или полностью состоящих из ферментов.^[11]

Механизмы

Сверхчувствительность можно достичь с помощью нескольких механизмов:

1. Многоступенчатые механизмы (примеры: кооперативность)^[12] и многосайтовое фосфорилирование^[13]
2. Механизмы буферизации (примеры: ложные сайты фосфорилирования)^[14] или стехиометрические ингибиторы^[15]
3. Изменения локализации (например, перемещение через ядерную оболочку)
4. Механизмы насыщения (также известные как сверхчувствительность нулевого порядка)^[16]
5. Положительный отзыв^[17]
6. Алловалентность
7. Сверхчувствительность ненулевого порядка в мембранных белках
8. Диссипативная аллостерия

Многоступенчатые механизмы

Многоступенчатая сверхчувствительность возникает, когда один эффектор действует на нескольких ступенях каскада.^[18] Последовательные каскадные сигналы могут привести к более высокому уровню шума, вносимого в сигнал, который может мешать окончательному выходу. Это особенно актуально для больших каскадов, таких как жгутиковая регуляторная система, в которой сигнал главного регулятора передается через множество промежуточных регуляторов перед активацией транскрипции.^[19] Каскадная сверхчувствительность может уменьшить шум и, следовательно, требует меньшего ввода для активации.^[12] Кроме того, множественные события фосфорилирования являются примером сверхчувствительности. Недавнее моделирование показало, что множественные сайты фосфорилирования на мембранных белках могут служить для локального насыщения активности фермента. Белки на мембране имеют значительно меньшую подвижность по сравнению с белками в цитоплазме, это означает, что связанный с мембраной фермент, действующий на мембранный белок, будет дольше диффундировать. С добавлением нескольких сайтов фосфорилирования на мембранном субстрате фермент может - за счет комбинации повышенной локальной концентрации фермента и увеличения субстратов - быстро достичь насыщения.^[20]

Механизмы буферизации

Механизмы буферизации, такие как молекулярные титрование может вызвать сверхчувствительность. В пробирке, это можно наблюдать для простого механизма:

${ displaystyle { ce {A + B <=> AB}}}$

Когда мономерная форма A активна и может быть инактивирована путем связывания B с образованием гетеродимера AB. Когда концентрация ${ displaystyle B_ {T}}$ (= [B] + [AB]) намного больше, чем ${ displaystyle K_ {d}}$, эта система имеет порог, определяемый концентрацией ${ displaystyle B_ {T}}$.^[21] При концентрациях ${ displaystyle A_ {T}}$ (= [A] + [AB]), ниже, чем ${ displaystyle B_ {T}}$, B действует как буфер для освобождения A, и почти все A будут найдены как AB. Однако в точке эквивалентности, когда ${ displaystyle A_ {T}}$ ≈ ${ displaystyle B_ {T}}$, ${ displaystyle B_ {T}}$ больше не может сдерживать рост ${ displaystyle A_ {T}}$, поэтому небольшое увеличение ${ displaystyle A_ {T}}$ вызывает большое увеличение A.^[22] Сила сверхчувствительности [A] к изменениям в ${ displaystyle A_ {T}}$ определяется ${ displaystyle B_ {T}}$/${ displaystyle K_ {d}}$.^[22] Сверхчувствительность возникает, когда это отношение больше единицы, и увеличивается по мере увеличения отношения. Выше точки эквивалентности ${ displaystyle A_ {T}}$ и A снова линейно связаны. В естественных условиях, синтез A и B, а также деградация всех трех компонентов усложняет генерацию сверхчувствительности. Если скорости синтеза A и B равны, эта система все еще проявляет сверхчувствительность в точке эквивалентности.^[22]

Одним из примеров механизма буферизации является секвестрация белка, которая является обычным механизмом, обнаруживаемым в сигнальных и регуляторных сетях.^[23] В 2009 году Бюхлер и Кросс построили синтетическую генетическую сеть, которая регулируется секвестрацией белка активатора транскрипции доминантно-отрицательным ингибитором. Они показали, что эта система приводит к гибкому сверхчувствительному ответу в экспрессии генов. Он гибок в том смысле, что степень сверхчувствительности может быть изменена путем изменения уровней экспрессии доминантно-отрицательного ингибитора. Рисунок 1 в их статье иллюстрирует, как активный фактор транскрипции может быть изолирован ингибитором в неактивный комплекс AB, который не может связывать ДНК. Этот тип механизма приводит к ответу «все или ничего», или сверхчувствительности, когда концентрация регуляторного белка увеличивается до точки истощения ингибитора. Ниже этого порогового значения концентрации существует надежная буферизация против реакции, и когда она достигается, любое небольшое увеличение входного сигнала усиливается в большое изменение выходного сигнала.^{[нужна цитата]}

Изменения в локализации

Перемещение

Передача сигналов регулируется по-разному, и одним из них является транслокация. Регулируемая транслокация вызывает сверхчувствительный ответ в основном тремя способами:

1. Регулируемая транслокация увеличивает локальную концентрацию сигнального белка. Когда концентрация сигнального белка достаточно высока, чтобы частично насытить фермент, который его инактивирует, возникает сверхчувствительный ответ.
2. Транслокация нескольких компонентов сигнального каскада, где стимул (входной сигнал) вызывает перемещение сигнального белка и его активатора в один и тот же субклеточный компартмент и, таким образом, генерирует сверхчувствительный ответ, который увеличивает скорость и точность сигнала.
3. Перемещение в компартмент, содержащий стехиометрические ингибиторы.^[4]

Транслокация - это один из способов регуляции передачи сигнала, и он может генерировать сверхчувствительные отклики, подобные переключателям, или механизмы многоступенчатой ​​обратной связи. Ответ, подобный переключателю, будет возникать, если транслокация увеличивает локальную концентрацию сигнального белка. Например, фактор роста эпидермиса (EGF) рецепторы могут быть интернализованы посредством клатриннезависимого эндоцитоза (CIE) и / или клатринзависимого эндоцитоза (CDE) в зависимости от концентрации лиганда. Было показано, что распределение рецепторов по двум путям зависит от концентрации EGF. В присутствии низких концентраций EGF рецептор интернализовался исключительно через CDE, тогда как при высоких концентрациях рецепторы равномерно распределялись между CDE и CIE.^[4][24]

Механизмы насыщения (сверхчувствительность нулевого порядка)

Сверхчувствительность нулевого порядка имеет место в условиях насыщения.^[25] Например, рассмотрим ферментативный этап с киназой, фосфатазой и субстратом. Уровни устойчивого состояния фосфорилированного субстрата обладают сверхчувствительным ответом, когда субстрата достаточно для насыщения всех доступных киназ и фосфатаз.^[25][26] В этих условиях небольшие изменения в соотношении активности киназы и фосфатазы могут резко изменить количество фосфорилированного субстрата (график, иллюстрирующий это поведение, см. ^[5]). Это повышение чувствительности устойчивого фосфорилированного субстрата к Km, или отношению киназы к активности фосфатазы, называется нулевым порядком, чтобы отличить его от поведения первого порядка, описанного динамикой Михаэлиса-Ментен, когда концентрация в устойчивом состоянии реагирует более постепенно, чем поведение переключателя, проявляющееся в сверхчувствительности.^[18]

Используя обозначения Goldbeter & Koshland,^[5] пусть W будет определенным белком-субстратом и пусть W 'будет ковалентно модифицированной версией W. Превращение W в W' катализируется некоторым ферментом ${ displaystyle { ce {E1}}}$ и обратное превращение W 'в W катализируется вторым ферментом ${ displaystyle { ce {E2}}}$ в соответствии со следующими уравнениями:

${ displaystyle { begin {array} {rcrcr} W + E_ {1} & { ce {<=> [a_1] [d_1]}} и WE_ {1} & { ce {-> [k_1] }} & W '+ E_ {1} {} W' + E_ {2} & { ce {<=> [a_2] [d_2]}} & W'E_ {2} & { ce {- > [k_2]}} & W + E_ {2} {} end {array}}}$

Предполагается, что концентрации всех необходимых компонентов (таких как АТФ) постоянны и представлены в кинетических константах. С помощью химических уравнений выше, реакция уравнения ставок для каждого компонента:

${ displaystyle { frac {d [W]} {dt}} = - a_ {1} [W] [E_ {1}] + d_ {1} [WE_ {1}] + k_ {2} [W ' E_ {2}]}$

${ displaystyle { frac {d [WE_ {1}]} {dt}} = a_ {1} [W] [E_ {1}] - (d_ {1} + k_ {1}) [WE_ {1} ]}$

${ displaystyle { frac {d [W ']} {dt}} = - a_ {2} [W'] [E_ {2}] + d_ {2} [W'E_ {2}] + k1 [WE_ {1}]}$

${ displaystyle { frac {d [W'E_ {2}]} {dt}} = a_ {2} [W '] [E_ {2}] - (d_ {2} + k_ {2}) [W 'E_ {2}]}$

Общая концентрация каждого компонента определяется как:

${ displaystyle [W_ {T}] = [W] + [W '] + [WE_ {1}] + [W'E_ {2}]}$

${ displaystyle [E_ {1T}] = [E_ {1}] + [WE_ {1}]}$

${ displaystyle [E_ {2T}] = [E_ {2}] + [W'E_ {2}]}$

Механизм нулевого порядка предполагает, что ${ Displaystyle [W_ {T}] gg [E_ {1}]}$ или же ${ displaystyle [E_ {2}]}$. Другими словами, система находится в устойчивом состоянии Михаэлиса-Ментен, что означает, в хорошем приближении, ${ displaystyle [WE_ {1}]}$ и ${ displaystyle [W'E_ {2}]}$ постоянны. из этих кинетических выражений можно найти ${ Displaystyle V_ {1} / V_ {2}}$ в установившемся режиме определения ${ Displaystyle W = [W] / [W_ {T}]}$ и ${ Displaystyle W = 1-W '}$

${ displaystyle { frac {V_ {1}} {V_ {2}}} = { frac {W ' left (1-W' + K_ {1} right)} { left (1-W ' right) left (W '+ K_ {2} right)}},}$

куда ${ displaystyle k_ {1} [WE_ {1}] = k_ {2} [W'E_ {2}]}$ и

${ displaystyle V_ {1} = k_ {1} [E_ {1T}],}$

${ displaystyle V_ {2} = k_ {2} [E_ {2T}],}$

${ displaystyle K_ {1} = { frac {d_ {1} + k_ {1}} {a_ {1} [W_ {T}]}} = { frac {K_ {M1}} {[W_ {T }]}},}$

${ displaystyle K_ {2} = { frac {d_ {2} + k_ {2}} {a_ {2} [W_ {T}]}} = { frac {K_ {M2}} {[W_ {T }]}}.}$

Когда ${ Displaystyle V_ {1} / V_ {2}}$ график зависимости от молярного отношения ${ displaystyle W '}$ и ${ displaystyle W}$ видно, что преобразование W в W 'происходит при гораздо меньшем изменении ${ Displaystyle V_ {1} / V_ {2}}$ соотношение, чем в условиях первого порядка (ненасыщения), что является контрольным признаком сверхчувствительности.

Положительный отзыв

Положительная обратная связь может вызывать сверхчувствительные реакции. Примером этого является транскрипция некоторых эукариотических генов, в которых некооперативное связывание факторов транскрипции изменяет петли положительной обратной связи модификации гистонов, что приводит к сверхчувствительной активации транскрипции. Связывание фактора транскрипции задействует гистоновые ацетилтрансферазы и метилтрансферазы. Ацетилирование и метилирование гистонов привлекает больше ацетилтрансфераз и метилтрансфераз, что приводит к положительной петле обратной связи. В конечном итоге это приводит к активации транскрипции.^[17]

Кроме того, положительная обратная связь может побудить бистабильность в Циклин В1- двумя регуляторами Wee1 и Cdc25C, что приводит к решению клетки совершить митоз. Система не может быть стабильной при промежуточных уровнях циклина B1, и переход между двумя стабильными состояниями является резким, когда повышение уровней циклина B1 переключает систему с низкой на высокую активность. Выставка гистерезис, для разных уровней Cyclin B1 переключение от низкого к высокому и от высокого к низкому состоянию различается.^[27] Однако на появление бистабильной системы сильно влияет чувствительность ее петель обратной связи. Это было показано в Xenopus яичные экстракты, гиперфосфорилирование Cdc25C является сверхчувствительной функцией активности Cdk, демонстрируя высокое значение Коэффициент Хилла (приблизительно 11), а стадия дефосфорилирования Ser 287 в Cdc25C (также участвующем в активации Cdc25C) еще более сверхчувствительна, показывая коэффициент Хилла приблизительно 32.^[28]

Алловалентность

Предлагаемый механизм сверхчувствительности, названный алловалентность, предполагает, что активность «происходит из высокой локальной концентрации сайтов взаимодействия, движущихся независимо друг от друга»^[29] Алловалентность была впервые предложена, когда считалось, что она возникает на пути, в котором Sic1, деградирует, чтобы Cdk1-Clb (Циклины B-типа), чтобы позволить вступить в митоз. Sic1 должен быть фосфорилирован несколько раз, чтобы он распознавался и расщеплялся Cdc4 СКФ Комплекс.^[30] Так как Cdc4 имеет только один сайт узнавания для этих фосфорилированных остатков, было высказано предположение, что по мере увеличения количества фосфорилирования оно экспоненциально увеличивает вероятность того, что Sic1 распознается и разрушается с помощью Cdc4. Считалось, что этот тип взаимодействия относительно невосприимчив к потере любого одного сайта и легко настраивается на любой заданный порог путем настройки свойств отдельных сайтов. Предположения о механизме алловалентности были основаны на общей математической модели, которая описывает взаимодействие между поливалентным неупорядоченным лигандом и единственным рецепторным сайтом.^[29] Позже было обнаружено, что сверхчувствительность на уровнях Cdk1 дегрегацией Sic1 на самом деле обусловлена ​​петлей положительной обратной связи.^[31]

Сверхчувствительность ненулевого порядка в мембранных белках

Моделирование Душек и другие.^[32] предлагает возможный механизм сверхчувствительности вне режима нулевого порядка. В случае мембраносвязанных ферментов, действующих на мембраносвязанные субстраты с множественными ферментативными сайтами (такими как тирозин-фосфорилированные рецепторы, такие как рецептор Т-клеток), можно было наблюдать сверхчувствительные ответы, в значительной степени зависящие от трех факторов: 1) ограниченная диффузия в мембрана, 2) множественные сайты связывания на субстрате и 3) кратковременная ферментативная инактивация после катализа.

В этих конкретных условиях, хотя фермент может находиться в избытке субстрата (режим первого порядка), фермент эффективно локально насыщается субстратом из-за множества сайтов связывания, что приводит к ответным реакциям, подобным переключателям. Этот механизм сверхчувствительности не зависит от концентрации фермента, однако сигнал значительно усиливается в зависимости от количества сайтов связывания на субстрате.^[32] Оба условных фактора (ограниченная диффузия и инактивация) физиологически правдоподобны, но еще не подтверждены экспериментально. Моделирование Душека обнаружило увеличение числа кооперативности Хилла с большим количеством сайтов субстрата (сайтов фосфорилирования) и с большим пространственным / диффузионным препятствием между ферментом и субстратом. Этот механизм сверхчувствительности, основанный на локальном насыщении ферментами, частично возникает из-за пассивных свойств медленной мембранной диффузии и поэтому может быть широко применим.

Диссипативная аллостерия

Было предложено, чтобы бактериальный жгутиковый мотор следовал диссипативной аллостерической модели, где сверхчувствительность возникает как комбинация аффинности связывания с белками и энергетических вкладов от движущей силы протонов (см. Жгутиковые моторы и хемотаксис ниже).

Влияние компонентов выше и ниже по потоку на сверхчувствительность модуля

В живой клетке сверхчувствительные модули встроены в более крупную сеть с вышестоящими и последующими компонентами. Эти компоненты могут ограничивать диапазон входов, которые модуль получит, а также диапазон выходов модуля, которые сеть сможет обнаружить. Altszyler et al. (2014)^[33] изучили, как эти ограничения влияют на эффективную сверхчувствительность модульной системы. Они обнаружили, что для некоторых сверхчувствительных мотивов ограничения динамического диапазона, налагаемые нижестоящими компонентами, могут создавать эффективную чувствительность, намного большую, чем у исходного модуля, если рассматривать их изолированно.

Коэффициент холма

Сверхчувствительное поведение обычно представлено сигмоидальной кривой в виде небольших изменений стимула. ${ displaystyle [L]}$ может вызвать большие изменения в ответе ${ displaystyle theta}$. Одним из таких соотношений является Уравнение Хилла:

${ displaystyle theta = { frac {[L] ^ {n}} {K_ {d} + [L] ^ {n}}} = { frac {[L] ^ {n}} {(K_ { A}) ^ {n} + [L] ^ {n}}},}$

куда ${ displaystyle n}$ представляет собой коэффициент Хилла, который количественно определяет крутизну сигмоидальной кривой «стимул-ответ» и, следовательно, является параметром чувствительности. Он часто используется для оценки кооперативности системы. Коэффициент Хилла больше единицы указывает на положительную кооперативность и, таким образом, система проявляет сверхчувствительность.^[34] Системы с коэффициентом Хилла, равным 1, несовместимы и следуют классической кинетике Михаэлиса-Ментен. Ферменты, проявляющие некооперативную активность, представлены кривыми гиперболического стимула / ответа по сравнению с сигмоидальными кривыми для кооперативных (сверхчувствительных) ферментов.^[35]При передаче сигналов митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) (см. Пример ниже) сверхчувствительность передачи сигналов поддерживается сигмоидальной кривой стимул / ответ, которая сопоставима с ферментом с коэффициентом Хилла 4,0-5,0. Это даже более чувствительно к кооперативной связывающей активности гемоглобина, который имеет коэффициент Хилла 2,8.^[35]

Расчет

С эксплуатационной точки зрения коэффициент Хилла можно рассчитать как:

${ displaystyle n_ {H} = { frac { ce { log (81)}} { ce { log (EC90 / EC10)}}}}$.

куда ${ displaystyle { ce {EC90}}}$ и ${ displaystyle { ce {EC10}}}$ - входные значения, необходимые для получения 10% и 90% максимального отклика соответственно.

Коэффициент отклика

Показатели глобальной чувствительности, такие как коэффициент Хилла, не характеризуют локальное поведение s-образных кривых. Вместо этого эти особенности хорошо отражаются с помощью меры коэффициента отклика. ^[36] определяется как:

${ displaystyle R (x) = { frac {x} {y}} { frac {dy} {dx}}}$

Связь между коэффициентом Хилла и коэффициентом отклика

Altszyler et al. (2017) показали, что эти меры сверхчувствительности могут быть связаны следующим уравнением:^[37]

${ displaystyle n_ {H} = 2 { frac { int _ { ce { log (EC10)}} ^ { ce { log (EC90)}} R_ {f} (I) d ( log I)} { ce { log (EC90) - log (EC10)}}} = 2 langle R_ {f} rangle _ { ce {EC10, EC90}}}$

куда ${ displaystyle langle X rangle _ {a, b}}$ обозначает среднее значение переменной x в диапазоне [a, b].

Сверхчувствительность в функциональном составе

Рассмотрим два связанных сверхчувствительных модуля, не учитывая эффекты связывания молекулярных компонентов между слоями. В этом случае выражение для кривой доза-ответ системы, ${ displaystyle F}$, является результатом математической композиции функций, ${ displaystyle f_ {i}}$, которые описывают отношения ввода / вывода изолированных модулей ${ displaystyle i = 1,2}$:

${ Displaystyle F (I_ {1}) = f_ {2} { big (} f_ {1} (I_ {1}) { big)}}$

Brown et al. (1997) ^[38] показали, что локальная сверхчувствительность различных слоев мультипликативно складывается:

${ Displaystyle R (x) = R_ {2} (f_ {1} (x)). R_ {1} (x)}$.

В связи с этим результатом Ferrell et al. (1997) ^[39] показал для модулей типа Хилла, что общая глобальная сверхчувствительность каскада должна быть меньше или равна произведению оценок глобальной сверхчувствительности каждого слоя каскада,

${ Displaystyle п Leq N_ {1} .n_ {2}}$,

куда ${ displaystyle n_ {1}}$ и ${ displaystyle n_ {2}}$ - коэффициент Хилла модулей 1 и 2 соответственно.

Altszyler et al. (2017) ^[37] показали, что глобальную сверхчувствительность каскада можно рассчитать аналитически:

${ displaystyle n = 2 overbrace { langle R_ {2} rangle _ {X10_ {2}, X90_ {2}}} ^ { nu _ {2}} overbrace { langle R_ {1} rangle _ {X10_ {1}, X90_ {1}}} ^ { nu _ {1}} = 2 , nu _ {2} , nu _ {1}}$

куда ${ displaystyle X10_ {i}}$ и ${ displaystyle X90_ {i}}$ ограничил рабочий диапазон входных данных Хилла составной системы, то есть входные значения для i-слоя так, чтобы последний слой (соответствующий ${ displaystyle i = 2}$ в данном случае) достиг 10% и 90% от максимального уровня выпуска. Из этого уравнения следовало, что коэффициент Хилла системы ${ displaystyle n}$ может быть записано как произведение двух факторов, ${ displaystyle nu _ {1}}$ и ${ displaystyle nu _ {2}}$, который характеризует локальную среднюю чувствительность по соответствующей входной области для каждого слоя: ${ displaystyle [X10_ {i}, X90_ {i}]}$, с ${ displaystyle i = 1,2}$ в этом случае.

Для более общего случая каскада ${ displaystyle N}$ модулей, коэффициент Хилла можно выразить как:

${ Displaystyle п = ню _ {N} , ню _ {N-1} ... ню _ {1}}$,

Супрамультипликативность

Несколько авторов сообщили о существовании супрамультипликативного поведения в сигнальных каскадах. ^[40][33](т.е. сверхчувствительность комбинации слоев выше, чем результат индивидуальных сверхчувствительности), но во многих случаях окончательное происхождение супрамультипликативности оставалось неуловимым. Altszyler et al. (2017)^[37] Структура естественно предложила общий сценарий, в котором могло иметь место супрамультипликативное поведение. Это могло произойти, когда для данного модуля соответствующий входной рабочий диапазон Хилла был расположен во входной области с локальной сверхчувствительностью выше, чем общая сверхчувствительность соответствующей кривой доза-реакция.

Роль в клеточных процессах

Сигнальный каскад MAP-киназы

Повсеместно распространенный сигнальный мотив, проявляющий сверхчувствительность, - это MAPK (митоген-активированная протеинкиназа) каскад, который может принимать ступенчатый входной сигнал и производить выходной сигнал, подобный переключателю, например транскрипция гена или же развитие клеточного цикла. В этом общем мотиве MAPK активируется более ранней киназой в каскаде, называемой киназой MAPK или MAPKK. Точно так же MAPKK активируется киназой MAPKK или MAPKKK. Эти киназы последовательно фосфорилируются, когда MAPKKK активируется, обычно через сигнал, полученный мембранно-связанным рецепторным белком. MAPKKK активирует MAPKK, а MAPKK активирует MAPK.^[35] Сверхчувствительность возникает в этой системе из-за нескольких особенностей:

1. MAPK и MAPKK требуют активации двух отдельных событий фосфорилирования.
2. Обращение МАПК фосфорилирование конкретными фосфатазы требует увеличения концентрации сигналов активации от каждой предшествующей киназы для достижения выхода такой же величины.
3. MAPKK находится в концентрации выше K_Μ для его специфической фосфатазы и MAPK находится в концентрации выше K_Μ для МАПКК.

Сверхчувствительность в каскаде митоген-активированных протеинов (MAP) киназ^[35]

Помимо каскада MAPK, сверхчувствительность также отмечалась при гликолизе мышц, фосфорилировании изоцитратдегидрогеназы и активации кальмодулин-зависимой протеинкиназы II (CAMKII).^[34]

Сверхчувствительный переключатель был разработан путем объединения простого линейного сигнального белка (N-WASP) с одним-пятью SH3 модули взаимодействия, обладающие автоингибирующими и кооперативными свойствами. Добавление одного модуля SH3 создавало переключатель, который линейно активируется экзогенным SH3-связывающим пептидом. Увеличение количества доменов увеличивает сверхчувствительность. Конструкция с тремя модулями SH3 была активирована с кажущимся коэффициентом Хилла 2,7, а конструкция с пятью модулями SH3 была активирована с кажущимся коэффициентом Хилла 3,9.^[41]

Перемещение

В течение Фаза G2 клеточного цикла, Cdk1 и циклин B1 делает сложным и формирует фактор, способствующий созреванию (MPF). Комплекс накапливается в ядре из-за фосфорилирования циклина B1 по нескольким сайтам, что ингибирует ядерный экспорт комплекса. Фосфорилирование остатков Thr19 и Tyr15 Cdk1 с помощью Wee1 и MYT1 сохраняет комплекс в неактивном состоянии и подавляет вступление в митоз, тогда как дефосфорилирование Cdk1 посредством CDC25C фосфатаза по остаткам Thr19 и Tyr15 активирует комплекс, необходимый для вступления в митоз. Фосфатаза Cdc25C присутствует в цитоплазме, и в поздней фазе G2 она перемещается в ядро ​​посредством передачи сигналов, таких как PIK1,^[42] ПИК3.^[43] Регулируемая транслокация и накопление множества необходимых компонентов сигнального каскада, MPF и его активатора Cdc25, в ядре генерирует эффективную активацию MPF и производит переключающийся сверхчувствительный вход в митоз.^[4]

Фигура^[4] показывает различные возможные механизмы того, как усиленная регуляция локализации сигнальных компонентов стимулом (входным сигналом) смещает выход от ответа Михаэля на сверхчувствительный ответ. Когда стимул регулирует только ингибирование ядерного экспорта Cdk1-cyclinB1, результатом является реакция Михаэля, рис (a). Но если стимул может регулировать локализацию нескольких компонентов сигнального каскада, то есть ингибирование ядерного экспорта Cdk1-cyclinB1 и транслокацию Cdc25C в ядро, то результатом является сверхчувствительный ответ, рис (b). По мере того, как больше компонентов сигнального каскада регулируются и локализуются стимулом, т.е. ингибирование ядерного экспорта Cdk1-cyclinB1, транслокация Cdc25C в ядро ​​и активация Cdc25C - выходной ответ становится все более и более сверхчувствительным, рис (c).^[4]

Буферизация (приманка)

В течение митоз, митотическое веретено ориентация важна для определения места бороздки дробления и положения дочерних клеток для последующего определение судьбы клетки.^[44] Эта ориентация достигается за счет поляризации корковых факторов и быстрого совмещения шпинделя с осью полярности. У плодовых мушек было обнаружено, что три корковых фактора регулируют положение веретена: гетеротримерный G-белок субъединица α (Gαi),^[45] Партнер Inscuteable (Pins),^[46] и грибовидный дефект тела (грязь).^[47] Gαi локализуется в апикальной коре, чтобы привлечь штифты. После связывания с GDP-связанным Gαi, штифты активируются и рекрутируют Mud для достижения поляризованного распределения корковых факторов.^[48] N-концевой тетратрикопептид повторы (TPR) в Pins являются областью связывания для Mud, но автоматически ингибируются внутренними C-концевыми доменами GoLoco (GL) в отсутствие Gαi.^[49][50] Активация пинов связыванием Gαi с GL очень высокочувствительна и достигается с помощью следующего механизма-приманки:^[14] GLs 1 и 2 действуют как домены-ловушки, конкурируя с регуляторным доменом GL3 за входы Gαi. Этот внутримолекулярный механизм-приманка позволяет штырям устанавливать свой порог и крутизну в ответ на различную концентрацию Gαi. При низких значениях Gαi ловушки GL 1 и 2 предпочтительно связаны. При промежуточной концентрации Gαi ловушки почти насыщаются, и GL3 начинает заселяться. При более высокой концентрации Gαi ловушки полностью насыщаются, и Gαi связывается с GL3, что приводит к активации штифтов. Сверхчувствительность штифтов в ответ на Gαi гарантирует, что штифты активируются только в апикальной коре, где концентрация Gαi выше порогового значения, что обеспечивает максимальное рекрутирование грязи.^{[нужна цитата]}

Коммутационное поведение GTPases

GTPases представляют собой ферменты, способные связывать и гидролизовать гуанозинтрифосфат (ГТФ). Малые GTPases, такие как Ran и Ras, могут существовать либо в форме, связанной с GTP (активная), либо в форме, привязанной к GDP (неактивная), и преобразование между этими двумя формами обеспечивает им поведение, подобное переключению.^[51] Таким образом, малые GTPases участвуют во многих клеточных событиях, включая ядерную транслокацию и передачу сигналов.^[52] Переход между активным и неактивным состояниями облегчается за счет факторы обмена гуаниновых нуклеотидов (ГЭФ) и Белки, активирующие ГТФазу (Пробелы).^[53]

Вычислительные исследования поведения переключения GTPases показали, что система GTPase-GAP-GEF проявляет сверхчувствительность.^[54] В своем исследовании Lipshtat et al. моделировали эффекты уровней активации GEF и GAP на сигнальную сеть активации Rap в ответ на сигналы от активированных α2-адренергических (α2R) рецепторов, которые приводят к деградации активированного Rap GAP. Они обнаружили, что поведение переключения Rap-активации было сверхчувствительным к изменениям концентрации (т. Е. Амплитуды) и длительности сигнала α2R, что давало Коэффициенты Хилла nH = 2,9 и nH = 1,7 соответственно (коэффициент Хилла больше nH = 1 характерен для сверхчувствительности ^[55]). Авторы подтвердили это экспериментально, обработав нейробласты HU-210, который активирует RAP через деградацию Rap GAP. Сверхчувствительность наблюдалась как дозозависимым образом (nH = 5 ± 0,2), при обработке клеток различными концентрациями HU-210 в течение фиксированного времени, так и зависимым от продолжительности образом (nH = 8,6 ± 0,8) при обработке клеток. с фиксированной концентрацией HU-210 в разное время.^{[нужна цитата]}

При дальнейшем изучении системы авторы определили, что (степень реакции и сверхчувствительность) сильно зависит от двух параметров: начального отношения kGAP / kGEF, где k включают как концентрацию активного GAP или GEF, так и их соответствующие кинетические скорости; и влияние сигнала, которое является продуктом скорости деградации активированного GAP и либо амплитуды сигнала, либо длительности сигнала.^[54] Параметр kGAP / kGEF влияет на крутизну перехода из двух состояний переключателя GTPase, при этом более высокие значения (~ 10) приводят к сверхчувствительности. Воздействие сигнала влияет на точку переключения. Следовательно, в зависимости от соотношения концентраций, а не от отдельных концентраций, переключательное поведение системы также может отображаться вне режима нулевого порядка.^[56]

Сверхчувствительность и нейрональная потенция

Постоянная стимуляция нейронального синапса может привести к заметно разным результатам для постсинаптического нейрона. Расширенная слабая сигнализация может привести к длительная депрессия (LTD), при котором активация постсинаптического нейрона требует более сильного сигнала, чем до того, как была инициирована LTD. В отличие, долгосрочное потенцирование (LTP) возникает, когда постсинаптический нейрон подвергается сильному стимулу, и это приводит к усилению нервного синапса (т.е. для активации требуется меньше сигнала нейромедиатора).

В области CA1 гиппокампа выбор между LTD и LTP опосредуется исключительно уровнем внутриклеточного ${ displaystyle { ce { scriptstyle Ca ^ {2} +}}}$ в постсинаптическом дендритном отростке. Низкий уровень ${ displaystyle { ce { scriptstyle Ca ^ {2} +}}}$ (в результате стимуляции низкого уровня) активирует протеинфосфатазу кальциневрин, что побуждает LTD. Более высокие уровни ${ displaystyle { ce { scriptstyle Ca ^ {2} +}}}$ приводит к активации ${ displaystyle scriptstyle color {синий} { ce {Ca ^ 2 +}}}$/ кальмодулин-зависимая протеинкиназа II (CaMKII), что приводит к LTP. Разница в Ca²⁺ концентрация, необходимая для того, чтобы клетка подверглась LTP, лишь незначительно выше, чем для LTD, и поскольку нейроны демонстрируют бистабильность (либо LTP, либо LTD) после постоянной стимуляции, это предполагает, что один или несколько компонентов системы реагируют переключающимся или сверхчувствительным манера. Bradshaw et al. продемонстрировали, что CaMKII (индуктор LTP) реагирует на уровни внутриклеточного кальция сверхчувствительным образом, с активностью <10% при 1,0 мкМ и ~ 90% активностью при 1,5 мкМ, в результате чего коэффициент Хилла составляет ~ 8. Дальнейшие эксперименты показали, что эта сверхчувствительность опосредована совместным связыванием CaMKII двумя молекулами кальмодулин (CaM) и аутофосфорилирование активированного CaMKII, что приводит к положительной обратной связи.^[57]

Таким образом, внутриклеточный кальций может вызывать постепенную, не сверхчувствительную активацию кальциневрина на низких уровнях, что приводит к LTD, тогда как сверхчувствительная активация CaMKII приводит к пороговому уровню внутриклеточного кальция, который создает петлю положительной обратной связи, которая усиливает сигнал и приводит к к противоположному клеточному исходу: LTP. Таким образом, связывание одного субстрата с множеством ферментов с разной чувствительностью облегчает бистабильное решение клетки подвергнуться LTD или LTP.^[58]

Сверхчувствительность в развитии

Было высказано предположение, что сверхчувствительность нулевого порядка может генерировать пороги во время развития, позволяющие преобразовать входной дифференцированный морфоген в бинарный ответ, подобный переключателю.^[59] Melen et al. (2005) нашли доказательства такой системы в формировании паттерна Дрозофила эмбриональный вентральный эктодерма.^[60] В этой системе градуированная активность митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) преобразуется в бинарный выходной сигнал, полное или нулевое разрушение репрессора транскрипции Yan. Они обнаружили, что фосфорилирование Yan по MAPK является важным и достаточным для деградации Yan. В соответствии со сверхчувствительностью нулевого порядка увеличение белка Yan увеличивало время, необходимое для деградации, но не влияло на границу деградации Yan в развивающихся эмбрионах. Их результаты согласуются с ситуацией, когда большой пул Янь либо полностью деградирует, либо поддерживается. Конкретный ответ каждой клетки зависит от того, больше или меньше скорость обратимого фосфорилирования Yan с помощью MAPK, чем дефосфорилирование. Таким образом, небольшое увеличение фосфорилирования MAPK может сделать его доминирующим процессом в клетке и привести к полной деградации Yan.

Многоступенчатый механизм обратной связи также приводит к сверхчувствительности

Механизм многоступенчатой ​​обратной связи также приводит к сверхчувствительности. Существует статья, в которой описывается создание синтетических петель обратной связи с использованием дрожжевого спаривания с митоген-активированным протеином (MAP) киназным путем в качестве модельной системы.

В пути спаривания дрожжей: альфа-фактор активирует рецептор, Ste2 и Ste4, а активированный Ste4 привлекает комплекс Ste5 к мембране, позволяя PAK-подобной киназе Ste20 (локализованной на мембране) активировать MAPKKK Ste11. Ste11 и расположенные ниже киназы, Ste7 (MAPKK) и Fus3 (MAPK), совместно локализуются на каркасе, и активация каскада приводит к транскрипционной программе. Они использовали модуляторы пути вне основного каскада, Ste50 способствует активации Ste11 с помощью Ste20; Msg5 (отрицательный, красный) представляет собой фосфатазу MAPK, которая дезактивирует Fus3 (рис. 2А).

То, что они построили, было схемой с улучшенным сверхчувствительным поведением переключателя, конститутивно экспрессирующим отрицательный модулятор Msg5, который является одним из MAPK-фофатаз, и индуцируемым выражением положительного модулятора Ste50, который является модуляторами пути вне основного каскада (рис. 2B). Успех этой стратегии инженерии, основанной на рекрутинге, предполагает, что возможно перепрограммировать клеточные ответы с высокой точностью.^[61]

Жгутиковые двигатели и хемотаксис

Направление вращения Кишечная палочка контролируется переключатель жгутикового двигателя. Кольцо из 34 белков FliM вокруг ротора связывает CheY, состояние фосфорилирования которого определяет, вращается ли двигатель по часовой стрелке или против часовой стрелки. Механизм быстрого переключения объясняется сверхчувствительным откликом, который имеет коэффициент Хилла ~ 10. Было предложено, чтобы эта система следовала диссипативной аллостерической модели, в которой переключение вращения является результатом как связывания CheY, так и потребления энергии из движущая сила протона, который также обеспечивает вращение жгутиков.^[62]

Разработка синтетического сверхчувствительного сигнального пути

Недавно было показано, что сигнальный путь Михаэля может быть преобразован в сверхчувствительный сигнальный путь путем введения двух петель положительной обратной связи.^[63] В этом подходе синтетической биологии Палани и Саркар начали с линейного, ступенчатого пути ответа, пути, который показал пропорциональное увеличение выходного сигнала относительно количества входного сигнала в определенном диапазоне входных сигналов. Этот простой путь состоит из мембранного рецептора, киназы и фактора транскрипции. При активации мембранный рецептор фосфорилирует киназу, которая перемещается в ядро ​​и фосфорилирует фактор транскрипции, который включает экспрессию гена. Чтобы преобразовать эту систему дифференцированного ответа в сверхчувствительный или подобный переключателю сигнальный путь, исследователи создали две петли положительной обратной связи. В сконструированной системе активация мембранного рецептора привела к повышенной экспрессии как самого рецептора, так и фактора транскрипции. Это было достигнуто путем размещения промотора, специфичного для этого фактора транскрипции, перед обоими генами. Авторам удалось продемонстрировать, что синтетический путь проявляет высокую сверхчувствительность и бистабильность.

Недавний вычислительный анализ влияния концентрации сигнального белка на присутствие сверхчувствительного ответа позволил сделать дополнительные выводы о влиянии концентрации сигнального белка на преобразование градуированного ответа в сверхчувствительный. Однако вместо того, чтобы сосредоточиться на генерации сигнальных белков посредством положительной обратной связи, исследование сосредоточилось на том, как динамика выхода сигнального белка из системы влияет на реакцию. Сойер, Кувахара и Чикас-Надь^[64] разработали сигнальный путь, состоящий из белка (P), который обладает двумя возможными состояниями (немодифицированный P или модифицированный P *) и может быть изменен входящим стимулом E. Кроме того, в то время как немодифицированной форме P разрешено входить или покидать системе, P * разрешено только покинуть (т.е. он не генерируется где-либо еще). После изменения параметров этой системы исследователи обнаружили, что изменение P в P * может переключаться между градиентным и сверхчувствительным ответом за счет изменения скоростей выхода P и P * относительно друг друга. Переход от сверхчувствительного ответа к E и постепенного ответа к E был произведен, когда две скорости переходили от очень сходных к сильно разнородным, независимо от кинетики превращения P в P *. Это открытие предполагает по крайней мере две вещи: 1) упрощающее предположение, что уровни сигнальных молекул остаются постоянными в системе, может сильно ограничить понимание сложности сверхчувствительности; и 2) можно искусственно индуцировать или ингибировать сверхчувствительность, регулируя скорости входа и выхода сигнальных молекул, занимающих интересующую систему.

Ограничения модульности

Было показано, что интеграция данного синтетического сверхчувствительного модуля с вышестоящими и последующими компонентами часто изменяет его возможности обработки информации.^[33] Эти эффекты необходимо учитывать в процессе проектирования.

Смотрите также

• Логистическая функция
• Ступенчатая функция Хевисайда
• Стимул (физиология)
• Уравнение Хилла (биохимия)

Рекомендации