WikiDer > Очистка нуклеиновых кислот на спин-колонке

Spin column-based nucleic acid purification
Кремнезем в спин-колонке с водой и с образцом ДНК в хаотропный буфер

Очистка нуклеиновых кислот на спин-колонке это твердофазная экстракция метод быстрого очищения нуклеиновые кислоты. Этот метод основан на том факте, что нуклеиновая кислота будет связывать к твердой фазе кремнезем при определенных условиях.

Процедура

Этапы метода: лизирование, связывание, промывание и элюирование, [1][2] то есть лизис клеток, связывание нуклеиновой кислоты с мембраной силикагеля, промывание нуклеиновой кислоты, связанной с мембраной силикагеля, и элюирование нуклеиновой кислоты.

Чтобы лизировать, клетки образец обрабатываются литический процедура, которая предполагает нарушение клеточная мембрана и высвобождение нуклеиновой кислоты.

Для переплета буферный раствор затем добавляется к образцу вместе с этиловый спирт или же изопропанол. Это образует связующий раствор. Связующий раствор переносят в спин-колонка и столбец помещается в центрифуга. Центрифуга проталкивает связывающий раствор через мембрану из силикагеля, которая находится внутри спин-колонки. Если pH и соль концентрации связывающего раствора являются оптимальными, нуклеиновая кислота будет связываться с мембраной силикагеля по мере прохождения раствора.

Для промывки сквозной поток удаляют и в колонку добавляют промывочный буфер. Колонку снова помещают в центрифугу, продавливая промывочный буфер через мембрану. Это удаляет любые оставшиеся примеси с мембраны, оставляя только нуклеиновую кислоту связанной с силикагелем.

Для элюирования промывочный буфер удаляют и элюирование буфер (или просто вода) добавляется в колонку. Колонку снова помещают в центрифугу, продавливая буфер для элюции через мембрану. Буфер для элюирования удаляет нуклеиновую кислоту с мембраны, и нуклеиновая кислота собирается со дна колонки.

Связанные методы

Еще до методы нуклеиновой кислоты нанятых сегодня было известно, что при наличии хаотропные агенты, Такие как йодид натрия или же перхлорат натрия, ДНК связывается с кремнеземом, частицы стекла или чтобы одноклеточный водоросли называется диатомеи которые защищают свои клеточные стенки кремнезем. Это свойство использовали для очистки нуклеиновой кислоты с использованием стеклянного порошка или гранул диоксида кремния в щелочных условиях.[3] Позже это было улучшено с помощью тиоцианат гуанидиния или же гуанидиния гидрохлорид как хаотропный агент.[4] Позже стеклянные шарики были заменены на силикагель.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Матсон, Роберт С. (2008). Методы и протоколы микрочипов. Бока-Ратон, Флорида: CRC. С. 27–29. ISBN 978-1420046656.
  2. ^ Кумар, Анил (2006). Генная инженерия. Нью-Йорк: Nova Science Publishers. С. 101–102. ISBN 159454753X.
  3. ^ Марко М.А., Чипперфилд Р., Бирнбойм ХК. Процедура крупномасштабного выделения высокоочищенной плазмидной ДНК с использованием щелочной экстракции и связывания со стеклянным порошком. Анальная биохимия. 1982 апр; 121 (2): 382-7.PMID 6179438
  4. ^ Boom R, Sol CJ, Salimans MM, Jansen CL, Wertheim-van Dillen PM, van der Noordaa J. Быстрый и простой метод очистки нуклеиновых кислот. J Clin Microbiol. 1990 Март; 28 (3): 495-503. PMID 1691208