WikiDer > Топоизомераза I типа

Type I topoisomerase
VirDNA-topo-I_N
PDB 1vcc EBI.jpg
амино-концевой домен 9kda ДНК топоизомеразы i вируса осповакцины, остатки 1-77, экспериментальная электронная плотность для остатков 1-77
Идентификаторы
СимволVirDNA-topo-I_N
PfamPF09266
ИнтерПроIPR015346
SCOP21vcc / Объем / СУПФАМ

В молекулярной биологии Топоизомеразы I типа находятся ферменты которые разрезают одну из двух цепей двухцепочечной ДНК, расслабляют цепь и повторно отжигают цепь. Кроме того, они подразделяются на две структурно и механически отличные топоизомеразы: тип IA и тип IB.

  • Топоизомеразы типа IA изменяют номер ссылки кольцевой цепи ДНК на единицы строго 1.
  • Топоизомеразы типа IB изменяют связующее число на 1 (n).

Исторически топоизомеразы типа IA называют прокариотическим топо I, а топоизомеразы типа IB называют эукариотической топоизомеразой. Однако это различие больше не применяется, поскольку топоизомеразы типа IA и IB существуют во всех сферах жизни.

Функционально эти подклассы выполняют очень специализированные функции. Прокариотический топоизомераза I (topo IA) может расслаблять только отрицательную суперспиральную ДНК, тогда как эукариотический топоизомераза I (topo IB) может вводить положительные суперспирали, разделяя ДНК дочерних хромосом после репликации ДНК, и расслаблять ДНК.

Функция

Эти ферменты имеют несколько функций: удалить ДНК суперспирали в течение транскрипция и Репликация ДНК; на обрыв пряди во время рекомбинация; за хромосома конденсация; и распутать переплетенную ДНК во время митоз.[1][2]

Структура

Этот домен предполагает бета (2) -альфа-бета-альфа-бета (2) складку с левосторонним кроссовером между цепями бета2 и бета3. Он имеет четыре перекрещенных бета-нити, окруженных четырьмя альфа-спиралями, которые расположены в складке Россмана.[3]

Механизмы

Топоизомеразы типа I представляют собой АТФ-независимые ферменты (кроме обратная гираза), и могут быть подразделены по их структура и механизмы реакции: тип IA (бактериальная и архейная топоизомераза I, топоизомераза III и обратная гираза) и тип IB (эукариотическая топоизомераза I и топоизомераза V). Эти ферменты в первую очередь отвечают за расслабление положительно и / или отрицательно свернутой ДНК, за исключением обратной гиразы, которая может вводить положительный суперспирали в ДНК.

ДНК топоизомеразы регулировать количество топологический связи между двумя нитями ДНК (т. е. изменение количества витков сверхспирали) за счет катализа временных одно- или двухцепочечных разрывов, пересечения цепей друг с другом и последующего закрытия разрывов.[4]

Классы

ДНК-топоизомеразы делятся на два класса: тип I ферменты (EC; топоизомеразы I, III и V) разрушают одноцепочечную ДНК, а ферменты типа II (EC; топоизомеразы II, IV и VI) разрывают двухцепочечную ДНК.[5]

Топоизомеразы типа IA

Структура topo III, связанного с одноцепочечной ДНК (pdb ID 1I7D). Обратите внимание, что ДНК напоминает ДНК B-формы.

Вступление

Топоизомеразы типа IA, исторически считавшиеся обнаруженными у прокариот, создают единственный разрыв в ДНК и пропускают вторую цепь или дуплекс через разрыв. Этот механизм прохождения цепи имеет несколько общих черт с топоизомеразами типа IIA. Оба они образуют 5'-фосфотирозиновый промежуточный продукт, и для его работы требуется ион двухвалентного металла. В отличие от топоизомеразы типа II, топоизомеразы типа IA не используют энергию для выполнения своей работы (за заметным исключением обратной гиразы, см. ниже).

Структура

Топоизомеразы типа IA имеют несколько доменов, часто это домены 1-4. Домен I содержит домен Toprim (складка Россмана, которая, как известно, координирует ионы магния), домен IV и домен III, каждый из которых состоит из домена спираль-поворот-спираль (HTH); каталитический тирозин находится на HTH домена III. Домен II - это гибкий мост между доменами III и IV. Структура топоизомеразы IA типа напоминает замок с доменами I, III и IV, лежащими на дне структуры.[6] Структура topo III (см. Ниже), связанная с одноцепочечной ДНК[7] (pdb id = 1I7D) показывает, как домен HTH и Toprim скоординирован относительно ДНК.

Варианты топоизомеразы типа IA

Существует несколько вариантов топоизомераз типа IA, различающихся отростками, прикрепленными к основному ядру (иногда их называют «топо-складкой»). Члены этого подкласса включают топо I, топо III (которые содержат дополнительные цинк-связывающие мотивы) и обратную гиразу. Обратная гираза особенно интересна, потому что присоединяется домен АТФазы, который напоминает геликазо-подобный домен фактора транскрипции Rho (структура обратной гиразы была решена Rodriguez and Stock, EMBO J 2002). Фермент использует гидролиз АТФ, чтобы ввести положительные суперспирали и перекрыть ДНК, что является привлекательной особенностью гипертермофилов, в которых, как известно, существует обратная гираза. Родригес и Сток проделали дополнительную работу, чтобы идентифицировать "защелку", которая участвует в передаче гидролиза АТФ введению положительных суперспиралей.

Вариант topo III также очень интересен, потому что он имеет цинк-связывающие мотивы, которые, как считается, связывают одноцепочечную ДНК. Было установлено, что Topo III связан с геликазой BLM (для синдрома Блума) во время рекомбинации.

Механизм

Топоизомеразы типа IA действуют через механизм прохождения цепей с использованием единственного гейта (в отличие от топоизомераз типа II). Во-первых, одноцепочечная ДНК связывает домены III и I. Каталитический тирозин расщепляет основную цепь ДНК, создавая временное 5'-фосфотирозиновое промежуточное соединение. Затем разрыв отделяется с использованием домена II в качестве шарнира и пропускается второй дуплекс или цепь ДНК. Домены III и I закрываются, и ДНК повторно отжигается.

Топоизомеразы типа IB

Важные остатки активного сайта топоизомеразы IB. ДНК окрашена в малиновый цвет.
Активный сайт топоизомеразы IB. ДНК окрашена в малиновый цвет с голубым остовом. (ID PDB = 1A36)

Вступление

В отличие от топоизомераз типа IA, топоизомераза типа 1B решает проблему перемотанной и перемотанной (также называемой положительно или отрицательно сверхспиральной) ДНК посредством механизма затрудненного вращения. Кристаллические структуры, биохимия и эксперименты с одиночными молекулами внесли свой вклад в общий механизм. Фермент сначала обволакивает ДНК и создает единственный промежуточный 3'-фосфотирозин. 5'-конец затем может свободно вращаться, скручивая его вокруг другой цепи, чтобы расслабить ДНК до тех пор, пока топоизомераза не повторно лигирует разорванные цепи.

Структура

Структура topo IB, связанного с ДНК, была решена (pdb id = 1A36). Topo IB состоит из NTD, кэпирующей доли, каталитической доли и С-концевого домена. Покрывающая доля и каталитическая доля охватывают ДНК.

Механизм

Расслабление - это не активный процесс, а энергия (в виде АТФ) не расходуется на этапах надрезания или лигирования; это потому, что реакция между тирозин остаток на активный сайт фермента с фосфодиэфир Основа ДНК просто заменяет одну фосфомоноэфирную связь другой. Топоизомераза также не использует АТФ во время раскрутки ДНК; скорее, крутящий момент, присутствующий в ДНК, вызывает раскручивание и в среднем энергично идет вниз. Недавние эксперименты с одиночными молекулами подтвердили то, что ранее предлагалось в экспериментах по релаксации объемной плазмиды, а именно, что раскручивание ДНК происходит под действием крутящего момента и продолжается до тех пор, пока не произойдет религия. Нет данных, свидетельствующих о том, что Topo IB «контролирует» поворот, поскольку у него есть механизм, который запускает религию после удаления определенного количества суперспиралей. Напротив, эксперименты с одной молекулой предполагают, что лигирование является случайным процессом и имеет некоторую вероятность происходить каждый раз, когда поворотный 5'-ОН-конец оказывается в непосредственной близости от сайта связывания 3'-конца, связанного с ферментом.

Топоизомеразы типа IB были первоначально идентифицированы у эукариот и вирусов. Вирусный topo I уникален, потому что он связывает ДНК специфическим для последовательности образом.

См. Статью ТОП1 для получения дополнительных сведений об этой хорошо изученной топоизомеразе типа 1B.

Топоизомеразы типа IC

Третий тип топоизомеразы I, topo V, был идентифицирован в археоне Methanopyrus kandleri. Topo V является членом-основателем и пока единственным членом топоизомеразы типа IC, хотя некоторые авторы предполагают, что она может иметь вирусное происхождение.[8] Решена кристаллическая структура topo V.[9] Топоизомеразы типа IC работают через управляемый вращающийся механизм, во многом как топоизомеразы типа IB.[10](ID PDB = 2CSB и 2CSD), но складка единственная.

Промежуточные звенья

Все топоизомеразы образуют промежуточный фосфотирозин между каталитическим тирозином фермента и ножницы фосфорил остова ДНК.

  • Топоизомеразы типа IA образуют ковалентную связь между каталитическим тирозином и 5'-фосфорилом.
  • Ферменты типа IB образуют ковалентный промежуточный 3'-фосфотирозин.
  • Топоизомеразы типа 1C образуют ковалентный 3'-фосфотирозиновый промежуточный продукт.

Этот промежуточный продукт является изоэнергетическим, что означает, что прямая реакция расщепления и обратная реакция религирования энергетически равны. Таким образом, для проведения этой реакции не требуется никакого внешнего источника энергии.

Торможение

Основная статья: Ингибитор топоизомеразы

Поскольку топоизомеразы генерируют разрывы в ДНК, они являются мишенями низкомолекулярных ингибиторов, которые ингибируют фермент. Топоизомераза типа 1 ингибируется иринотекан, топотекан и камптотецин.

Фермент топоизомераза типа IB человека образует ковалентный промежуточный 3'-фосфотирозин, комплекс топоизомеразы 1-расщепления (Top1cc). В активный метаболит иринотекана, СН-38, действует захватом (делая тройной комплекс с) подмножество Top1cc, имеющих гуанин +1 в последовательности ДНК.[11] Одна производная иринотекана молекула SN-38 складывается против пар оснований, фланкирующих сайт расщепления, индуцированного топоизомеразой, и отравляет (инактивирует) топоизомераза 1 фермент.[11]

На бактериофаг (фаг) Т4 инфекция его бактериального хозяина, кишечная палочка, фаг геном указывает генный продукт (gp55.2), который ингибирует бактериальную топоизомеразу I.[12] Gp55.2 связывает ДНК и специфически блокирует релаксацию отрицательно свернутой ДНК топоизомеразой I. Это ингибирование, по-видимому, является адаптацией для тонкой модуляции активности топоизомеразы I хозяина во время инфекции для обеспечения оптимального выхода фага.

Синтетическая летальность

Основная статья: TOP1 § Синтетическая летальность

Синтетическая летальность возникает, когда комбинация недостаточности экспрессии двух или более генов приводит к гибели клеток, тогда как дефицит только одного из этих генов этого не делает. Недостатки могут возникать в результате мутации, эпигенетических изменений или ингибирования экспрессии гена.

Ингибирование топоизомеразы 1 является синтетическим летальным исходом при недостаточной экспрессии определенных генов репарации ДНК. У пациентов-людей дефицитные гены репарации ДНК включают: WRN[13] и MRE11.[14] В доклинические исследования связанные с раком, дефицитные гены репарации ДНК включают Банкомат[15] и NDRG1.[16][17]

Аутоантитела

Основная статья: Антитела против Scl-70

Аутоантитела нацеленные против топоизомеразы I типа, называются антитела против Scl-70, названный ассоциацией с sclэродермия и 70 кД экстрагируемый иммунореактивный фрагмент, который может быть получен из более крупной (100-105 кДа) целевой топоизомеразы антиген (называемый антигеном SCL-70) антител.[18]

Рекомендации

  1. ^ Ван Дж.С. (июнь 2002 г.). «Клеточные роли топоизомераз ДНК: молекулярная перспектива». Nat. Преподобный Мол. Cell Biol. 3 (6): 430–40. Дои:10.1038 / nrm831. PMID 12042765.
  2. ^ Шампу Дж. Дж. (2001). «Топоизомеразы ДНК: структура, функция и механизм». Анну. Преподобный Biochem. 70: 369–413. Дои:10.1146 / annurev.biochem.70.1.369. PMID 11395412.
  3. ^ Шарма А; Hanai R; Мондрагон А (август 1994 г.). «Кристаллическая структура амино-концевого фрагмента топоизомеразы I ДНК вируса коровьей оспы при разрешении 1,6 A». Структура. 2 (8): 767–77. Дои:10.1016 / s0969-2126 (94) 00077-8. PMID 7994576.
  4. ^ Рока Дж. (Апрель 1995 г.). «Механизмы ДНК-топоизомераз». Trends Biochem. Наука. 20 (4): 156–60. Дои:10.1016 / s0968-0004 (00) 88993-8. PMID 7770916.
  5. ^ Гадель Д., Филе Дж., Бюлер С., Фортер П. (март 2003 г.). «Филогеномика ДНК-топоизомераз II типа». BioEssays. 25 (3): 232–42. Дои:10.1002 / bies.10245. PMID 12596227.
  6. ^ Lima, C.D .; Wang, J. C .; Мондрагон, А (1994). «Трехмерная структура N-концевого фрагмента 67K ДНК-топоизомеразы I. Coli». Природа. 367 (6459): 138–46. Дои:10.1038 / 367138a0. PMID 8114910.
  7. ^ Чангела, А; Digate, R.J .; Мондрагон, А (2001). «Кристаллическая структура комплекса топоизомеразы ДНК типа IA с одноцепочечной молекулой ДНК». Природа. 411 (6841): 1077–81. Дои:10.1038/35082615. PMID 11429611.
  8. ^ Forterre P (июнь 2006 г.). «ДНК-топоизомераза V: новая складка загадочного происхождения». Тенденции биотехнологии. 24 (6): 245–7. Дои:10.1016 / j.tibtech.2006.04.006. PMID 16650908.
  9. ^ Танеха Б., Патель А., Слесарев А., Мондрагон А. (январь 2006 г.). «Структура N-концевого фрагмента топоизомеразы V раскрывает новое семейство топоизомераз». EMBO J. 25 (2): 398–408. Дои:10.1038 / sj.emboj.7600922. ЧВК 1383508. PMID 16395333.
  10. ^ Танежа, Б; Schnurr, B; Слесарев А; Марко, Дж. Ф .; Мондрагон, А (2007). «Топоизомераза V расслабляет сверхспиральную ДНК с помощью ограниченного механизма поворота». Труды Национальной академии наук. 104 (37): 14670–5. Дои:10.1073 / pnas.0701989104. ЧВК 1976220. PMID 17804808.
  11. ^ а б Помье Y (2013). «Применение топоизомераз: уроки и проблемы». ACS Chem. Биол. 8 (1): 82–95. Дои:10.1021 / cb300648v. ЧВК 3549721. PMID 23259582.
  12. ^ Mattenberger Y, Silva F, Belin D. 55.2, ген ORFan фага T4, кодирует ингибитор топоизомеразы I Escherichia coli и увеличивает приспособленность фага. PLoS One. 2015 14 апреля; 10 (4): e0124309. DOI: 10.1371 / journal.pone.0124309. PMID: 25875362; PMCID: PMC4396842
  13. ^ Agrelo R, Cheng WH, Setien F, Ropero S, Espada J, Fraga MF, Herranz M, Paz MF, Sanchez-Cespedes M, Artiga MJ, Guerrero D, Castells A, von Kobbe C, Bohr VA, Esteller M (2006) . «Эпигенетическая инактивация гена синдрома Вернера преждевременного старения при раке человека». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 103 (23): 8822–7. Дои:10.1073 / pnas.0600645103. ЧВК 1466544. PMID 16723399.
  14. ^ Павелиц Т., Ренфро Л., Фостер Н. Р., Каракол А., Велш П., Лаос В. В., Грейди В. Б., Недзвецки Д., Зальц Л. Б., Бертаньолли М. М., Гольдберг Р. М., Рабинович П. С., Эмонд М., Моннат Р. Дж., Майзелс Н. (2014). «Дефицит MRE11, связанный с улучшением долгосрочной выживаемости без болезней и общей выживаемости в подгруппе пациентов с раком толстой кишки III стадии в рандомизированном исследовании CALGB 89803». PLoS ONE. 9 (10): e108483. Дои:10.1371 / journal.pone.0108483. ЧВК 4195600. PMID 25310185.
  15. ^ Субхаш В.В., Тан Ш., Йео М.С., Ян Ф.Л., Питала П.С., Лием Н., Кришнан В., Йонг В.П. (2016). «Экспрессия ATM предсказывает чувствительность к Велипарибу и Иринотекану при раке желудка, опосредуя независимую от P53 регуляцию клеточного цикла и апоптоза». Мол. Рак Ther. 15 (12): 3087–3096. Дои:10.1158 / 1535-7163.MCT-15-1002. PMID 27638859.
  16. ^ Wissing MD, Mendonca J, Kim E, Kim E, Shim JS, Kaelber NS, Kant H, Hammers H, Commes T, Van Diest PJ, Liu JO, Kachhap SK (2013). «Идентификация цетримония бромида и иринотекана как соединений с синтетической летальностью против клеток рака предстательной железы с дефицитом NDRG1». Cancer Biol. Ther. 14 (5): 401–10. Дои:10.4161 / cbt.23759. ЧВК 3672184. PMID 23377825.
  17. ^ Доминик Дж., Боуман Дж., Ли Х, Миллер Р.А., Гарсия Дж. Г. (2016). «mTOR регулирует экспрессию ферментов ответа на повреждение ДНК у долгоживущих мышей Snell dwarf, GHRKO и PAPPA-KO». Ячейка старения. 16 (1): 52–60. Дои:10.1111 / acel.12525. ЧВК 5242303. PMID 27618784.
  18. ^ Название продукта: Антиген SCL-70 В архиве 2006-03-19 на Wayback Machine на ImmunoVision.com, получено в апреле 2011 г.

внешняя ссылка