WikiDer > SDS-СТРАНИЦА

SDS-PAGE
Белки эритроцит мембраны, разделенные методом SDS-PAGE в соответствии с их молекулярными массами

SDS-СТРАНИЦА (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия), это прерывная электрофоретическая система разработан Ульрих К. Лэммли который обычно используется как метод разделения белки с молекулярными массами от 5 до 250 кДа.[1] [2] Совместное использование додецилсульфата натрия (SDS, также известного как лаурилсульфат натрия) и полиакриламидного геля позволяет исключить влияние структуры и заряда, а белки разделяются исключительно на основе различий в их молекулярной массе.

Характеристики

Разворачивание белка с помощью SDS
Разворачивание белка с помощью тепла

SDS-PAGE - это метод электрофореза, который позволяет разделить белок по массе. Среда (также называемая «матрицей») представляет собой прерывистый гель на основе полиакриламида. Кроме того, SDS (додецилсульфат натрия) используется. Около 1,4 грамма SDS связываются с граммом белка,[3][4][5] соответствует одной молекуле SDS на две аминокислоты. SDS действует как поверхностно-активное вещество, маскируя внутренний заряд белков и придавая им очень похожие отношения заряда к массе. Собственные заряды белков пренебрежимо малы по сравнению с загрузкой SDS, и положительные заряды также значительно уменьшаются в основном диапазоне pH разделяющего геля. При приложении постоянного электрического поля белок перемещается к аноду, каждый с разной скоростью, в зависимости от его массы. Эта простая процедура позволяет точно разделить белок по массе.

SDS имеет тенденцию формировать сферическую форму. мицеллы в водных растворах выше определенной концентрации, называемой критическая мицеллярная концентрация (CMC). Выше критической мицеллярной концентрации от 7 до 10 миллимолей в растворах ДСН одновременно встречается в виде отдельных молекул (мономер) и как мицеллы ниже CMC SDS встречается только в виде мономеров в водных растворах. При критической концентрации мицелл мицелла состоит примерно из 62 молекул SDS.[6] Однако только мономеры SDS связываются с белками посредством гидрофобных взаимодействий, тогда как мицеллы SDS являются анионными снаружи и не адсорбируют какой-либо белок.[3] SDS является амфипатическим по природе, что позволяет ему раскрывать как полярные, так и неполярные участки структуры белка.[7] При концентрациях SDS выше 0,1 миллимоля начинается развертывание белков,[3] и выше 1 мМ большинство белков денатурированы.[3] Благодаря сильному денатурирующему эффекту SDS и последующей диссоциации белковых комплексов, четвертичные структуры вообще не может быть определено с помощью SDS. Исключение составляют белки, стабилизированные ковалентной сшивание например -S-S- связи и SDS-устойчивые белковые комплексы, которые стабильны даже в присутствии SDS (последний, однако, только при комнатной температуре). Для денатурирования устойчивых к SDS комплексов требуется высокая энергия активации, которая достигается за счет нагревания. Устойчивость к SDS основана на метастабильности белковой складки. Хотя нативный, полностью свернутый, устойчивый к SDS белок не обладает достаточной стабильностью в присутствии SDS, химическое равновесие денатурация при комнатной температуре происходит медленно. Стабильные белковые комплексы характеризуются не только устойчивостью к SDS, но и устойчивостью к протеазы и увеличенный биологический период полураспада.[8]

В качестве альтернативы, электрофорез в полиакриламидном геле также можно проводить с катионными поверхностно-активными веществами. CTAB на CTAB-PAGE,[9][10][11] или же 16-BAC в BAC-PAGE.[12]

Процедура

Метод SDS-PAGE состоит из подготовки геля, пробоподготовки, электрофореза, окрашивания белков или вестерн-блоттинг и анализ созданного рисунка полос.

Производство гелей

Образцы гребней с разным количеством карманов, каждый зубец оставляет карман в геле при извлечении
Полимеризованный разделяющий и укладывающий гель перед удалением образца гребенка (белый) между разделителями (черный), в укладочном геле небольшие количества бромфенолового синего для улучшения видимости, разделяющий гель не окрашен

При использовании различных буферов в геле (прерывистый гель-электрофорез) гели готовятся за один день до электрофореза, так что распространение не приводит к перемешиванию буферов. Гель производится радикальная полимеризация в форме, состоящей из двух герметичных стеклянных пластин с прокладками между стеклянными пластинами. В типичной настройке мини-геля прокладки имеют толщину 0,75 мм или 1,5 мм, что определяет несущую способность геля. Для заливки гелевого раствора пластины обычно зажимают на подставке, которая временно закрывает открытую нижнюю сторону стеклянных пластин двумя прокладками. Для гелевого раствора акриламид смешивается в качестве гелеобразователя (обычно 4% об. / Об. В геле для укладки и 10-12% в разделяющем геле), метиленбисакриламид в качестве сшивающего агента, буфер для накопления или разделения геля, вода и SDS. . Добавляя катализатор ТЕМЕД и радикальный инициатор персульфат аммония (APS) начинается полимеризация. Затем раствор заливается между стеклянными пластинами, не создавая пузырей. В зависимости от количества катализатора и радикального стартера и в зависимости от температуры полимеризация длится от четверти часа до нескольких часов. Сначала наливают нижний гель (разделяющий гель) и покрывают несколькими каплями водорастворимого спирта (обычно насыщенного буфером бутанола или изопропанола), который удаляет пузырьки из мениск и защищает гелевый раствор радикальный мусорщик кислород. После полимеризации разделяющего геля спирт удаляют, а остаточный спирт удаляют с помощью фильтровальная бумага. После добавления APS и TEMED к раствору накопительного геля его выливают поверх твердого разделительного геля. После этого между стеклянными пластинами вставляется подходящая гребенка для образцов без образования пузырей. Гребень для образца осторожно вынимают после полимеризации, оставляя карманы для нанесения образца. Для последующего использования белков для секвенирование белков, гели часто готовят за день до электрофореза, чтобы уменьшить реакцию неполимеризованного акриламида с цистеины в белках.

Используя градиентный смесительможно отливать градиентные гели с градиентом акриламида (обычно от 4 до 12%), которые имеют больший диапазон разделения молекулярных масс.[13] Коммерческие гелевые системы (т.н. готовые гели) обычно используют буферное вещество Бис-трис-метан со значением pH от 6,4 до 7,2 как в геле для укладки, так и в геле для разделения.[14][15] Эти гели поставляются в литом виде и готовы к использованию. Поскольку они используют только один буфер (непрерывный гель-электрофорез) и имеют почти нейтральный pH, их можно хранить несколько недель. Более нейтральный pH замедляет гидролиз и, следовательно, разложение полиакриламида. Кроме того, в белках содержится меньше цистеинов, модифицированных акриламидом.[14] Благодаря постоянному pH в собирающем и разделяющем геле эффект складывания отсутствует. Белки в гелях Бистрис не окрашиваются комплексами рутения.[16] Эта гелевая система имеет сравнительно большой диапазон разделения, который можно варьировать, используя МЧС или же MOPS в рабочем буфере.[14]

Базовые приготовления

Восстановление дисульфидов с помощью DTT

Во время подготовки образца к белкам в избытке добавляют буфер для образцов и, следовательно, SDS, и затем образец нагревают до 95 ° C в течение пяти минут или, альтернативно, до 70 ° C в течение десяти минут. Нагревание нарушает вторичный и третичные структуры белка, нарушая водородные связи и растягивание молекул. Необязательно, дисульфидные мостики можно расколоть восстановлением. Для этого уменьшая тиолы Такие как β-меркаптоэтанол (β-ME, 5% по объему), дитиотреитол (DTT, 10 миллимолярных) или дитиоэритрит (DTE, 10 миллимолярных) добавляются в буфер для образца. После охлаждения до комнатной температуры каждый образец пипеткой переносят в отдельную лунку в геле, который предварительно был погружен в буфер для электрофореза в аппарате для электрофореза.

Помимо образцов, маркер размера молекулярной массы обычно наносится на гель. Он состоит из белков известных размеров и, таким образом, позволяет оценить (с ошибкой ± 10%) размеры белков в реальных образцах, которые мигрируют параллельно по разным дорожкам геля.[17] Маркер размера часто вводится пипеткой в ​​первый или последний карман геля.

Электрофорез

Камера для электрофореза через несколько минут электрофореза. В первый карман нанесли маркер размера с бромфеноловым синим, в другие карманы добавили образцы. бромкрезоловый зеленый

Для разделения денатурированные образцы загружают в гель из полиакриламида, который помещают в буфер для электрофореза с подходящими электролитами. После этого Напряжение (обычно около 100 В, 10-20 В на см длины геля), что вызывает миграцию отрицательно заряженных молекул через гель в направлении положительно заряженных молекул. анод. Гель действует как сито. Небольшие белки относительно легко перемещаются через сетку геля, тогда как более крупные белки с большей вероятностью будут удерживаться и, таким образом, более медленно мигрируют через гель, что позволяет разделить белки по размеру молекул. Электрофорез длится от получаса до нескольких часов в зависимости от напряжения и длины используемого геля.

Наиболее быстро мигрирующие белки (с молекулярной массой менее 5 кДа) образуют буферный фронт вместе с анионными компонентами буфера для электрофореза, которые также мигрируют через гель. Область буферного фронта становится видимой благодаря добавлению сравнительно небольшого анионного красителя. бромфеноловый синий в буфер образцов. Из-за относительно небольшого размера молекулы бромфенолового синего он мигрирует быстрее, чем белки. Путем оптического контроля мигрирующей цветной полосы электрофорез можно остановить до того, как краситель полностью пройдет через гель и покинет его.

Наиболее часто используемый метод - это прерывистый SDS-PAGE. В этом методе белки сначала мигрируют в собирающий гель с нейтральным pH, в котором они концентрируются, а затем они мигрируют в разделяющий гель с основным pH, в котором и происходит фактическое разделение. Укладывание и разделение гелей различаются поры размер (4-6% т и 10-20% т), ионная сила и значения pH (pH 6,8 или pH 8,8). Чаще всего используется электролит, содержащий SDS. Трис-глицин-хлористый буфер система. При нейтральном pH глицин преимущественно образует цвиттерионный формы, при высоком pH глицины теряют положительные заряды и становятся преимущественно анионными. В собирающем геле более мелкие отрицательно заряженные ионы хлорида мигрируют перед белками (как ведущие ионы), а несколько более крупные, отрицательно и частично положительно заряженные ионы глицината мигрируют за белками (как начальные замыкающие ионы), тогда как в сравнительно основной разделяющий гель: оба иона перемещаются впереди белков. Градиент pH между буферами накопительного геля и разделительного геля приводит к эффекту накопления на границе накопительного геля с разделительным гелем, так как глицинат частично теряет свои замедляющие положительные заряды по мере увеличения pH, а затем, как бывший замыкающий ион, обгоняет белков и становится ведущим ионом, из-за чего полосы различных белков (видимых после окрашивания) становятся более узкими и резкими - эффект наложения. Для разделения более мелких белков и пептидов TRIS-Трицин Буферная система Шеггера и фон Ягова используется из-за более высокого распространения белков в диапазоне от 0,5 до 50 кДа.[18]

Окрашивание гелем

Окрашенный кумасси 10% гель трис / трицин. В левой полосе для оценки размера использовали маркер размера молекулярной массы (сверху вниз: 66, 45, 35, 24, 18 и 9 кДа). На оставшихся дорожках разделяли очищенные дрожжевые белки.

В конце электрофоретического разделения все белки сортируются по размеру и затем могут быть проанализированы другими методами, например. грамм. белковое окрашивание, такое как Кумасси окрашивание (наиболее распространенное и простое в использовании),[19][20] окрашивание серебром (высочайшая чувствительность),[21][22][23][24][25][26] пятнает все окрашивание, Амидо черный 10B окрашивание,[20] Быстрый зеленый FCF окрашивание,[20] флуоресцентные пятна, такие как эпикокконон пятно[27] и краситель SYPRO оранжевый,[28] и иммунологическое обнаружение, такое как Вестерн-блоттинг.[29][30] Флуоресцентные красители имеют сравнительно более высокую линейность между количеством белка и интенсивностью цвета примерно на три порядка величины выше Предел обнаружения, я. е. количество белка можно оценить по интенсивности окраски. При использовании флуоресцентного белкового красителя трихлорэтанол, последующее окрашивание белка исключается, если его добавляли к раствору геля и гель облучали УФ-светом после электрофореза.[31][32]

В Кумасси Окрашивание, гель фиксируется в 50% этаноле и 10% растворе ледяной уксусной кислоты в течение 1 часа. Затем раствор заменяют на свежий, и через 1–12 часов гель заменяют на окрашивающий раствор (50% метанол, 10% ледяная уксусная кислота, 0,1% кумасси бриллиантовый синий) с последующим обесцвечиванием, меняя несколько раз обесцвечивающий раствор 40%. метанол, 10% ледяная уксусная кислота.

Анализ

Окрашивание белков в геле создает документально подтвержденный рисунок полос различных белков. Гликопротеины иметь разные уровни гликозилирование и более неравномерно адсорбирует SDS при гликозилировании, что приводит к более широким и размытым полосам.[33] Мембранные белки, из-за их трансмембранный домен, часто состоят из более гидрофобных аминокислот, имеют более низкую растворимость в водных растворах склонны связывать липиды, и склонны осаждаться в водных растворах из-за гидрофобные эффекты когда нет достаточного количества моющего средства. Это преципитация проявляется для мембранных белков в SDS-PAGE в «хвосте» над полосой трансмембранного белка. В этом случае можно использовать больше SDS (за счет использования более или более концентрированного буфера для образца) и уменьшить количество белка в приложении для образца. Перегрузка геля растворимым белком создает полукруглую полосу этого белка (например, в маркерной полосе изображения при 66 кДа), позволяя покрыть другие белки с аналогичными молекулярными массами. Низкий контраст (как на маркерной полосе изображения) между полосами внутри полосы указывает либо на присутствие многих белков (низкая чистота), либо, если используются очищенные белки и низкий контраст наблюдается только ниже одной полосы, это указывает на протеолитическое разложение. белка, который сначала вызывает полосы деградации, а после дальнейшей деградации дает однородный цвет («мазок») под полосой.[34] Документирование рисунка полос обычно делается путем фотографирования или сканирования. Для последующего восстановления молекул в отдельных полосах экстракция геля может быть выполнено.

Архивирование

Два геля SDS после завершения разделения образцов и окрашивания в сушильной рамке

После окрашивания белков и документирования рисунка полос полиакриламидный гель можно высушить для архивного хранения. Позже из него можно будет извлечь белки. Гель помещают в сушильную раму (с использованием тепла или без него) или в вакуумную сушилку. Сушильная рама состоит из двух частей, одна из которых служит основанием для влажной целлофан пленка, к которой гель и один процент глицерин раствор. Затем накладывается вторая влажная целлофановая пленка без пузырей, вторая часть рамки надевается сверху и рамка фиксируется зажимами. Удаление пузырьков воздуха позволяет избежать фрагментации геля во время сушки. Вода испаряется через целлофановую пленку. В отличие от сушильной рамы, вакуумная сушилка создает вакуум и нагревает гель примерно до 50 ° C.

Определение молекулярной массы

Белки маркера размера (черный X) показывают приблизительно прямую линию в представлении log M над Rf. Молекулярный вес неизвестного белка (красный X) можно определить по оси ординат.

Для более точного определения молекулярной массы в разделяющем геле измеряют расстояния относительной миграции отдельных полос белка.[35][36] Для повышения точности измерения обычно проводят в трех экземплярах. Относительная подвижность (называемая значением Rf или значением Rm) представляет собой частное от расстояния полосы белка и расстояния до фронта буфера. Расстояния полос и фронт буфера измеряются от начала разделительного геля. Расстояние до фронта буфера примерно соответствует расстоянию до бромфенолового синего, содержащегося в буфере для образца. Относительные расстояния между белками маркера размера нанесены на график полулогарифмически относительно их известных молекулярных масс. Путем сравнения с линейной частью сгенерированного графика или с помощью регрессионного анализа молекулярная масса неизвестного белка может быть определена по его относительной подвижности. Полосы белков с гликозилированием могут быть размытыми.[33] Белки с множеством основных аминокислот (например, гистоны)[37] могут привести к завышению молекулярной массы или даже вообще не мигрировать в гель, потому что они движутся медленнее при электрофорезе из-за положительных зарядов или даже в противоположном направлении. Соответственно, многие кислые аминокислоты могут привести к ускоренной миграции белка и недооценке его молекулярной массы.[38]

Приложения

SDS-PAGE в сочетании с окрашиванием белков широко используется в биохимии для быстрого и точного разделения и последующего анализа белков. У него сравнительно низкие затраты на приборы и реагенты, и он является простым в использовании методом. Из-за его низкого масштабируемость, он в основном используется в аналитических целях и в меньшей степени в препаративных целях, особенно когда необходимо выделить большие количества белка.

Кроме того, SDS-PAGE используется в сочетании с вестерн-блот для определения присутствия определенного белка в смеси белков - или для анализа посттрансляционные модификации. Посттрансляционные модификации белков могут приводить к другой относительной подвижности (т.е. сдвиг полосы) или к изменению связывания детектирующего антитела, используемого в вестерн-блоттинге (т.е.полоса исчезает или появляется).

В масс-спектрометрии белков, SDS-PAGE является широко используемым методом подготовки проб перед спектрометрией, в основном с использованием переваривание в геле. Что касается определения молекулярной массы белка, SDS-PAGE немного более точен, чем аналитический ультрацентрифугирование, но менее точен, чем масс-спектрометрии или - игнорирование посттрансляционных модификаций - расчет молекулярной массы белка из Последовательность ДНК.

В медицинской диагностике SDS-PAGE используется как часть Тест на ВИЧ и оценить протеинурия. В тесте на ВИЧ белки ВИЧ разделяются с помощью SDS-PAGE и затем обнаруживаются вестерн-блоттингом с ВИЧ-специфическим антитела пациента, если они присутствуют в его сыворотка крови. SDS-PAGE для протеинурии оценивает уровни различных сывороточные белки в моче, например Альбумин, Альфа-2-макроглобулин и IgG.

Варианты

SDS-PAGE - это наиболее широко используемый метод гель-электрофоретического разделения белков. Двумерный гель-электрофорез последовательно объединяет изоэлектрическая фокусировка или BAC-PAGE с SDS-PAGE. Родная страница используется, если необходимо сохранить сворачивание нативного белка. Для разделения мембранных белков BAC-PAGE или CTAB-PAGE можно использовать в качестве альтернативы SDS-PAGE. Для электрофоретического разделения более крупных белковых комплексов, электрофорез в агарозном геле можно использовать, например то SDD-AGE. Немного ферменты можно обнаружить по их ферментная активность к зимография.

Альтернативы

Будучи одним из наиболее точных и недорогих методов разделения и анализа белков, SDS-PAGE денатурирует белки. Если необходимы неденатурирующие условия, белки разделяют с помощью нативного PAGE или другого хроматографический методы с последующим фотометрический количественная оценка, Например аффинная хроматография (или даже тандемная аффинная очистка), эксклюзионная хроматография, ионообменная хроматография.[39] Белки также можно разделить по размеру в тангенциальная фильтрация потока[40] или ультрафильтрация.[41] Отдельные белки можно выделить из смеси с помощью аффинной хроматографии или с помощью анализ методом вытягивания вниз. Некоторые исторически ранние и экономически эффективные, но грубые методы разделения, обычно основанные на серии извлечения и осадки с помощью космотропный молекулы, например осаждение сульфатом аммония и полиэтиленгликоль осадки.

История

В 1948 г. Арне Тизелиус был награжден Нобелевская премия по химии за открытие принципа электрофореза как миграции заряженных и растворенных атомов или молекул в электрическом поле.[42] Использование твердой матрицы (изначально бумажных дисков) в зональный электрофорез улучшено разделение. Прерывистый электрофорез 1964 г., проведенный Л. Орнштейном и Б. Дж. Дэвисом, позволил улучшить разделение за счет эффекта суммирования.[43] Использование сшитых полиакриламидных гидрогелей, в отличие от ранее использовавшихся бумажных дисков или крахмальных гелей, обеспечило более высокую стабильность геля и отсутствие микробного разложения. Денатурирующий эффект SDS в непрерывных полиакриламидных гелях и последующее улучшение разрешения были впервые описаны в 1965 г. Дэвид Ф. Саммерс в рабочей группе Джеймс Э. Дарнелл для разделения белков полиовируса.[44] Текущий вариант SDS-PAGE был описан в 1970 году Ульрихом К. Лэммли и первоначально использовался для характеристики белков в головной части бактериофаг Т4.[1] Эта статья Лэммли широко цитируется как изобретение современного SDS-PAGE, но на самом деле этот метод был изобретен Джейком Майзелем, который был в творческом отпуске в лаборатории MRC, когда Лэммли присоединился к лаборатории в качестве постдокторанта. Майзел поделился своей предыдущей технологией с Лэммли, и вместе они внесли дальнейшие улучшения. Лэммли и Майзель планировали продолжить работу с докладом о методах, но этого не произошло. Майзель в кратких комментариях рассказывает об истории развития SDS-PAGE.[45]

Рекомендации

  1. ^ а б Лэммли, У.К. (1970). «Расщепление структурных белков во время сборки головки бактериофага Т4». Природа. 227 (5259): 680–685. Bibcode:1970Натура.227..680л. Дои:10.1038 / 227680a0. ISSN 0028-0836. PMID 5432063. S2CID 3105149.
  2. ^ Neue Zürcher Zeitung: Интервью с Ульрихом Ляммли на немецком языке. NZZ Folio, № 11, 2005. По состоянию на 4 марта 2012 г.
  3. ^ а б c d Рейнольдс Дж. А., Чарльз Танфорд (1970). «Связывание додецилсульфата с белками при высоких соотношениях связывания. Возможные последствия для состояния белков в биологических мембранах». Proc Natl Acad Sci U S A. 66 (3): 1002–7. Bibcode:1970ПНАС ... 66.1002Р. Дои:10.1073 / pnas.66.3.1002. ЧВК 283150. PMID 5269225.
  4. ^ Смит, Б. Дж. (1984). "SDS-полиакриламидный гель-электрофорез белков". Белки. Методы молекулярной биологии. 1. С. 41–56. Дои:10.1385/0-89603-062-8:41. ISBN 0-89603-062-8. PMID 20512673.
  5. ^ Стаикос, Георгиос; Дондос, Анастасиос (2009). «Изучение комплексов додецилсульфат-белок натрия: доказательство их червеобразной конформации, если рассматривать их как полимеры со случайной спиралью». Коллоидная и полимерная наука. 287 (8): 1001–1004. Дои:10.1007 / s00396-009-2059-3. ISSN 0303-402X. S2CID 97367384.
  6. ^ Турро, Николас Дж .; Йекта, Ахмад (1978). «Люминесцентные зонды для растворов моющих средств. Простая процедура определения среднего числа агрегации мицелл». Журнал Американского химического общества. 100 (18): 5951–5952. Дои:10.1021 / ja00486a062. ISSN 0002-7863.
  7. ^ Берг, Джереми М. (2015-04-08). Биохимия. Тимочко, Джон Л., 1948-, Гатто, Грегори Дж., Младший (Грегори Джозеф), Страйер, Люберт. (Восьмое изд.). Нью-Йорк. ISBN 9781464126109. OCLC 913469736.
  8. ^ Мэннинг М., Колон В. (2004). «Структурная основа кинетической стабильности белка: устойчивость к додецилсульфату натрия предполагает центральную роль жесткости и склонность к структуре бета-слоя». Биохимия. 43 (35): 11248–54. Дои:10.1021 / bi0491898. PMID 15366934.
  9. ^ Буксбаум, Энгельберт (2003). «Катионный электрофорез и электроперенос мембранных гликопротеинов». Аналитическая биохимия. 314 (1): 70–76. Дои:10.1016 / S0003-2697 (02) 00639-5. ISSN 0003-2697. PMID 12633604.
  10. ^ Акин, Дайан Т .; Шапира, Раймонд; Кинкейд, Джозеф М. (1985). «Определение молекулярных масс биологически активных белков электрофорезом в полиакриламидном геле цетилтриметиламмония бромид». Аналитическая биохимия. 145 (1): 170–176. Дои:10.1016/0003-2697(85)90343-4. ISSN 0003-2697. PMID 4003759.
  11. ^ Симпсон, Р. Дж. (2010). "CTAB-PAGE". Протоколы Колд-Спринг-Харбор. 2010 (4): pdb.prot5412. Дои:10.1101 / pdb.prot5412. ISSN 1559-6095. PMID 20360366.
  12. ^ Хартингер, Иоахим; Стениус, Катинка; Хёгеманн, Дагмар; Ян, Рейнхард (1996). «16-BAC / SDS – PAGE: система двумерного гель-электрофореза, подходящая для разделения интегральных мембранных белков». Аналитическая биохимия. 240 (1): 126–133. Дои:10.1006 / abio.1996.0339. ISSN 0003-2697. PMID 8811889.
  13. ^ Марголис Дж, Кенрик К.Г. (1969). «Двумерное разрешение белков плазмы с помощью комбинации полиакриламидного диска и градиентного гель-электрофореза». Природа. 221 (5185): 1056–7. Bibcode:1969Натура.221.1056М. Дои:10.1038 / 2211056a0. PMID 5774398. S2CID 4197850.
  14. ^ а б c Hachmann, John P .; Амши, Джозеф В. (2005). «Модели модификации белков в трис-глициновых гелях и бис-трис-гелях с нейтральным pH во время электрофореза: влияние pH геля». Аналитическая биохимия. 342 (2): 237–245. Дои:10.1016 / j.ab.2005.04.015. ISSN 0003-2697. PMID 15935323.
  15. ^ Вильтфанг, Йенс; Арольд, Норберт; Нойхофф, Фолькер (1991). «Новая многофазная буферная система для электрофореза в полиакриламидном геле додецилсульфата натрия белков и пептидов с молекулярными массами 100 000-1000 и их обнаружения с пикомолярной чувствительностью». Электрофорез. 12 (5): 352–366. Дои:10.1002 / elps.1150120507. ISSN 0173-0835. PMID 1718736. S2CID 40101706.
  16. ^ Мебиус, Ян; Денкер, Катрин; Зикманн, Альберт (2007). «Дисульфонат трис-батофенантролина рутения (II) хорошо подходит для Tris-Glycine PAGE, но не для гелей Bis-Tris». Протеомика. 7 (4): 524–527. Дои:10.1002 / pmic.200600642. ISSN 1615-9853. PMID 17309097. S2CID 25822873.
  17. ^ Ян М. Розенберг (22 декабря 2006 г.). Анализ и очистка белков: настольные методы. Springer Science & Business Media. С. 103–. ISBN 978-0-8176-4412-3.
  18. ^ Шеггер, Германн; фон Ягов, Гебхард (1987). «Электрофорез в трицин-додецилсульфат-полиакриламидном геле для разделения белков в диапазоне от 1 до 100 кДа». Аналитическая биохимия. 166 (2): 368–379. Дои:10.1016/0003-2697(87)90587-2. ISSN 0003-2697. PMID 2449095.
  19. ^ Fazekas de St. Groth, S .; Webster, R.G .; Датынер, А. (1963). «Две новые процедуры окрашивания для количественной оценки белков на электрофоретических полосках». Biochimica et Biophysica Acta. 71: 377–391. Дои:10.1016/0006-3002(63)91092-8. PMID 18421828.
  20. ^ а б c Уилсон CM (1979). «Исследования и критика Amido Black 10B, Coomassie Blue R и Fast Green FCF как красителей для белков после электрофореза в полиакриламидном геле». Анальный биохим. 96 (2): 263–78. Дои:10.1016/0003-2697(79)90581-5. PMID 89822.
  21. ^ Merril, C.R .; Switzer, R.C .; Керен, М. Л. Ван (1979). «Следы полипептидов в клеточных экстрактах и ​​жидкостях человеческого тела, обнаруженные с помощью двумерного электрофореза и высокочувствительного окрашивания серебром». Proc Natl Acad Sci U S A. 76 (9): 4335–4339. Bibcode:1979ПНАС ... 76.4335М. Дои:10.1073 / пнас.76.9.4335. ЧВК 411569. PMID 92027.
  22. ^ Р. С. Свитцер, К. Р. Меррил, С. Шифрин (сентябрь 1979 г.), "Высокочувствительное окрашивание серебром для обнаружения белков и пептидов в полиакриламидных гелях", Анальный биохим (на немецком), 98 (1), стр. 231–237, Дои:10.1016/0003-2697(79)90732-2, PMID 94518CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  23. ^ Blum, H .; Beier, H .; Гросс, Х. Дж. (1987). «Улучшенное окрашивание серебром растительного белка, РНК и ДНК в гелях PAA». Электрофорез. 8: 93–99. Дои:10.1002 / elps.1150080203. S2CID 84471792.
  24. ^ Rabilloud, T .; и другие. (1988). «Улучшение и упрощение низкофонового окрашивания белков серебром с использованием дитионита натрия». Электрофорез. 9 (6): 288–291. Дои:10.1002 / elps.1150090608. PMID 2466660. S2CID 33007991.
  25. ^ Рабийо, Т. (1992). «Сравнение низкофонового окрашивания диаммином серебра и белком нитрата серебра». Электрофорез. 13 (7): 429–439. Дои:10.1002 / elps.1150130190. PMID 1425556. S2CID 43084621.
  26. ^ Lelong, C .; Chevallet, M .; Luche, S .; Рабийо, Т. (2009). Окрашивание белков серебром в гелях 2DE (PDF). Методы Мол биол. 519. С. 339–350. Дои:10.1007/978-1-59745-281-6_21. ISBN 978-1-58829-937-6. PMID 19381593. S2CID 52820065.
  27. ^ Moritz, Christian P .; Marz, Sabrina X .; Рейсс, Ральф; Шуленборг, Томас; Фриауф, Экхард (февраль 2014 г.). "Окрашивание эпикоккононом: мощный контроль загрузки для вестерн-блоттинга.". Протеомика. 14 (2–3): 162–8. Дои:10.1002 / pmic.201300089. PMID 24339236. S2CID 206368546.
  28. ^ Александр Петрович Демченко: Advanced Fluorescence Reporter in Chemistry and Biology III: Applications in Sensing and Imaging Band 3 von Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology. Springer 2011, ISBN 978-3-642-18035-4, С. 179ff.
  29. ^ Галлахер, Шон; Чакаварти, Деб (2008). «Окрашивание белков в гелях». Журнал визуализированных экспериментов (17). Дои:10.3791/760. ISSN 1940-087X. ЧВК 3253607. PMID 19066521.
  30. ^ Уилсон CM (1983). «Окрашивание белков на гелях: сравнение красителей и процедур». Методы Энзимол. 91: 236–47. Дои:10.1016 / с0076-6879 (83) 91020-0. PMID 6190068.
  31. ^ Ladner CL, Ян Дж., Тернер RJ, Эдвардс Р.А. (2004). «Видимое флуоресцентное обнаружение белков в полиакриламидных гелях без окрашивания». Анальный биохим. 326 (1): 13–20. Дои:10.1016 / j.ab.2003.10.047. PMID 14769330.
  32. ^ Гильда Дж. Э., Гомес А. В. (2013). «Окрашивание общего белка без красителей является лучшим контролем нагрузки по сравнению с β-актином для вестерн-блоттинга». Анальный биохим. 440 (2): 186–8. Дои:10.1016 / j.ab.2013.05.027. ЧВК 3809032. PMID 23747530.
  33. ^ а б Крио-ЭМ Часть A: Подготовка проб и сбор данных. Академическая пресса. 30 сентября 2010. с. 28. ISBN 978-0-08-095695-4.
  34. ^ Ричард Р. Берджесс; Мюррей П. Дойчер (3 ноября 2009 г.). Руководство по очистке белков. Академическая пресса. С. 184–. ISBN 978-0-08-092317-8.
  35. ^ Филип Л.Р. Боннер; Алан Дж. Харгривз (24 августа 2011 г.). Основные лабораторные методы биологических наук: карманное руководство. Джон Вили и сыновья. С. 140–. ISBN 978-1-119-95644-0.
  36. ^ Мартин Хольцхауэр (13 сентября 2006 г.). Основные методы для биохимической лаборатории. Springer Science & Business Media. стр. 243–. ISBN 978-3-540-32786-8.
  37. ^ W.J. van Venrooij; Равиндер Н. Майни (6 декабря 2012 г.). Руководство по биологическим маркерам болезней. Springer Science & Business Media. С. 50–. ISBN 978-94-011-1670-1.
  38. ^ Гуань, Ихонг; Чжу, Циньфан; Хуанг, Делай; Чжао, Шуйи; Ян Ло, Ли; Пэн, Цзиньжун (2015). «Уравнение для оценки разницы между теоретически предсказанными и отображаемыми в SDS PAGE молекулярными массами для кислого пептида». Научные отчеты. 5 (1): 13370. Bibcode:2015НатСР ... 513370Г. Дои:10.1038 / srep13370. ISSN 2045-2322. ЧВК 4550835. PMID 26311515.
  39. ^ Ян-Кристер Янсон (3 января 2012 г.). Очистка белков: принципы, методы высокого разрешения и применения. Джон Вили и сыновья. ISBN 978-1-118-00219-3.
  40. ^ Мохамед А. Десаи (2000). Последующая обработка белков: методы и протоколы. Springer Science & Business Media. п. 35. ISBN 978-1-59259-027-8.
  41. ^ Гош Раджа (11 июня 2003 г.). Биоразделение белков с использованием ультрафильтрации: теория, применение и новые разработки. World Scientific. п. 142. ISBN 978-1-78326-126-0.
  42. ^ Педерсон, Т. (2007). «Переворачивание страницы: ощущение электрофореза в SDS-поликриламидном геле в течение ночи». Журнал FASEB. 22 (4): 949–953. Дои:10.1096 / fj.08-0402ufm. ISSN 0892-6638. PMID 18378803. S2CID 33466516.
  43. ^ Орнштейн, Л .; Дэвис, Б. Дж. (1964). «Дисковый электрофорез –1. Предпосылки и теория». Энн Нью-Йорк Академия наук. 121 (2): 321–349. Bibcode:1964НЯСА.121..321О. Дои:10.1111 / j.1749-6632.1964.tb14207.x. PMID 14240533. S2CID 28591995.
  44. ^ Саммерс Д. Ф., Майзель СП, Дарнелл Дж. Э. (1965). «Доказательства вирус-специфических некапсидных белков в инфицированных полиовирусом клетках HeLa». Proc Natl Acad Sci U S A. 54 (2): 505–13. Bibcode:1965ПНАС ... 54..505С. Дои:10.1073 / пнас.54.2.505. ЧВК 219696. PMID 4285933.
  45. ^ Майзел младший, Дж (2000-12-01). «Электрофорез в полиакриламидном геле SDS». Тенденции в биохимических науках. 25 (12): 590–592. Дои:10.1016 / S0968-0004 (00) 01693-5. PMID 11116183.

внешняя ссылка